二氢叶酸还原酶和谷氨酰胺合成酶双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响

作     者：王志云 魏博 田淑芳 张玉倩 王秀平 楚雍烈 阮力 

作者机构：西安交通大学西安710061 中国预防医学科学院病毒学研究所 石家庄华北制药厂 

基　　金："八六三"高科技发展计划资助项目 ( 86 3 0 2 0 7 0 2 0 1 86 3 10 2 0 7 0 1 0 2 ) 国家杰出青年基金资助课题 ( 395 2 5 0 0 1) 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2002年第16卷第1期

页      码：59-61页

摘      要：目的　研究二氢叶酸还原酶 (DHFR ,D)与谷氨酰胺合成酶 (GS ,G)单基因和二氢叶酸还原酶与谷氨酰胺合成酶 (DHFR +GS ,DG)双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。方法　选择N端部分TPO基因 (T1 84)作为靶基因 ,以DHFR和GS基因作为筛选及扩增基因构建重组质粒pDCT1 84与pGCT1 84,将两种质粒分别转染CHOdhfr- 细胞形成单基因筛选扩增系统 ,两种质粒共转染CHOdhfr-细胞形成双基因筛选扩增系统。在双基因筛选扩增系统中设计三种药物加压方式。第一种为DG方式 :先用DHFR系统压力 (MTX)筛选 ,再用GS系统压力 (MSX)筛选 ;第二种为GD方式 :先用GS系统压力筛选 (MSX) ,再用DHFR系统压力筛选 (MTX) ;第三种为共加压方式 :同时利用DHFR与GS系统压力筛选 (MTX +MSX)。通过比较T1 84基因拷贝数及表达水平来研究DHFR和GS双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。结果　T1 84基因拷贝数及表达水平在DG双基因筛选扩增系统不同药物加压方式中 ,均比DHFR或GS单基因筛选扩增系统高 ,但不同药物选择方式没有明显差异。结论　采用DHFR +GS双基因筛选扩增系统共加压方式是提高CHOdhfr-

主 题 词：四氢叶酸脱氢酶 谷氨酰胺合成酶 基因扩增 甲氨喋呤 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2002.01.016

馆 藏 号：203958194...