我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA的构建

作     者：欧武 秦鄂德 杨翠红 杨佩英 于曼 

作者机构：军事医学科学院微生物流行病学研究所病毒室北京100850 

基　　金：国家自然科学基金资助项目!( 3 9770 0 3 6) 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2001年第21卷第2期

页      码：206-209页

摘      要：目的　构建我国登革 2型病毒 43株基因组全长cDNA ,为进一步研究其体外RNA转录产物的感染性 ,阐明致病机理及探索新型疫苗奠定基础。方法　根据登革 2型病毒参考株NGC株的核苷酸序列 ,利用DNASTAR软件设计覆盖登革 2型病毒 43株基因组的 6对重叠引物。从感染登革 2型病毒 43株的乳鼠脑中提取病毒基因组RNA ,采用RT PCR分别扩增 6条基因片段 ,并将其分别与pGEM T载体进行连接。重组质粒用PCR进行快速鉴定 ,并在 377A型自动测序仪进行序列分析。然后利用单一酶切位点 ,分别自阳性重组子上切下各基因片段 ,在体外分别进行 5′半分子和 3′半分子的连接 ,最后将 5′和 3′半分子连接成基因组全长的cDNA。扩增各接头两侧长约 45 7～ 6 91bp的基因片段 ,连接至T载体后测序 ,从而对全长cDNA进行鉴定。结果　共扩增出 6条约 1 5～ 2 5kb的基因片段 ,并在体外进行连接 ,获得了全长cDNA。结论　通过测序证实成功地构建了我国登革 2型病毒 43株基因组全长cDNA分子。本研究结果将为阐明我国登革病毒株的毒力及致病机理奠定基础。

主 题 词：登革病毒感染 基因组 全长cDNA 登革病毒 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j:issn:0254-5101.2001.02.031

馆 藏 号：203958198...