基于SYBR Green Ⅰ的桑树皱叶病毒qPCR检测方法的建立及应用

作     者：孙鑫 张健 杨磊 卢全有 Sun Xin;Zhang Jian;Yang Lei;Lu Quanyou

作者机构：江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212018 中国农业科学院蚕业研究所农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室江苏镇江212018 

基　　金：江苏省高校自然科学研究重大项目(18KJA210001) 

出 版 物：《蚕业科学》 (ACTA SERICOLOGICA SINICA)

年 卷 期：2020年第46卷第2期

页      码：140-145页

摘      要：根据桑树皱叶病毒(mulberry crinkle leaf virus,MCLV)cp基因的核苷酸序列,设计了3对用于实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的引物,以含有cp基因全长序列的重组质粒为模板,通过PCR和熔解曲线分析筛选出1对适合用于qPCR的特异性引物。以10倍梯度稀释的含有cp基因全长序列的重组质粒为模板,进行SYBR GreenⅠqPCR并制作标准曲线,建立了MCLV的qPCR检测方法。该方法对MCLV cp基因的检测灵敏度≥47.8个拷贝/μL。利用建立的qPCR方法对大田样品进行检测,结果显示15个样品都为MCLV感染阳性,其中病毒含量最高的样品的病毒拷贝数为5.26×10^4个拷贝/μL,最低的样品为8.36×10^2个拷贝/μL。MCLV qPCR检测体系的建立可以为培育健康桑树种苗、预防病毒病的发生提供精准保障技术,也为研究桑树不同生长时期或不同组织中病毒滴度变化奠定了基础。

主 题 词：桑树皱叶病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR(qPCR) 检测 灵敏度 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 

D　O　I：10.13441/j.cnki.cykx.2020.02.002

馆 藏 号：203959838...