RNAi沉默Fas受体表达的腺病毒载体构建

作     者：刘明社 赵中夫 王兰 张国英 张芸 封江南 

作者机构：长治医学院肝病研究所046000 山西大学生命科学与技术学院 武汉市晶赛生物工程技术有限公司 

基　　金：山西省自然基金资助项目(20051114) 

出 版 物：《长治医学院学报》 (Journal of Changzhi Medical College)

年 卷 期：2006年第20卷第3期

页      码：161-165页

摘      要：目的:利用pEGFP6-1和pGenesil-1质粒构建针对小鼠Fas的2个短发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)串联表达的载体pEGFP6-1-siFas1+siFas2,进一步通过BDAdeno-X系统构建腺病毒表达Fas-shRNA载体。方法:设计表达2个短发卡状RNA结构的互补DNA序列分别克隆至质粒载体pEGFP6-1和pGenesil-1中,酶切pEGFP6-1-siFas1大片段和酶切pGenesil-1-siFas2小片段,经T4DNALigase连接得到pEGFP6-1-siFas1+siFas2重组质粒。双酶切重组质粒和pShuttle2穿梭质粒,经T4DNA连接酶连接得到pShuttle2-siFas1+siFas2质粒。双酶切重组穿梭质粒,连接酶切产物和腺病毒转化感受态***5а,PCR筛选鉴定阳性克隆,进一步线性化重组腺病毒pAdeno-siFas1+siFas2质粒,经脂质体转染HEK293A细胞;收细胞进行裂解收病毒。结果:构建的重组质粒载体经酶切鉴定和测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致;重组腺病毒载体经酶切鉴定和PCR分析正确;经HEK293A细胞包装成功,能够表达绿色荧光蛋白。结论:成功构建Fas-shRNA腺病毒串联表达载体。

主 题 词：Fas(CD95) RNAi 腺病毒载 shRNA 串联 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-0588.2006.03.001

馆 藏 号：203962862...