鸡毒支原体SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：孙俊颖 刘志成 孙敏华 李冰玲 沈海燕 张春红 董嘉文 李林林 张建峰 

作者机构：广东省农业科学院动物卫生研究所广东广州510640 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640 广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640 北京出入境检验检疫局北京100026 

基　　金：国际科技合作项目(2014DFA31730 2012B050500013 2013J4500031) 国家自然科学基金(31302101) 广东省科技计划项目(2014A040401048) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2015年第37卷第12期

页      码：938-942页

摘      要：为建立鸡毒支原体(MG)的快速定量检测方法,本研究根据GenBank中登录的MG 16S rDNA基因序列设计了一对引物,以MG基因组DNA为模板扩增其16S rDNA基因片段,并克隆于pMD18-T载体中,以纯化的重组质粒作为标准品建立了MG SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法在1.96×10~8拷贝/μL^1.96×10~2拷贝/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.999;最低检测限可达1.96×10~1拷贝/μL;与禽类其它呼吸道病原无交叉反应,特异性良好;批内及批间变异系数均低于2%,具有较高的重复性和稳定性。采用该方法抽检30份疑似临床样品,检出率为40%,敏感性明显高于常规PCR(33%)和血清平板凝集试验方法(23%),检测活疫苗可达到精确定量每头份2.0×10~7拷贝/μL。该研究为MG的早期诊断与净化、疫苗质量监测提供了一种新的快速定量检测技术。

主 题 词：鸡毒支原体 SYBR Green I 荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.2015.12.10

馆 藏 号：203966815...