猪流行性腹泻病毒3C样蛋白酶(3CLpro)的真核表达及生物信息学分析

作     者：梁荣 丁芳艺 宋海鑫 张金秋 费荣梅 LIANG Rong;DING Fangyi;SONG Haixin;ZHANG Jinqiu;FEI Rongmei

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 

基　　金：国家自然科学基金(31772701) 江苏省农业科技自主创新资金(CX(17)3027) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第52卷第9期

页      码：80-87页

摘      要：3C样蛋白酶(3CLpro)是冠状病毒的主蛋白酶,在病毒复制及致病过程中发挥重要作用。本研究旨在对猪流行性腹泻病毒3C样蛋白酶(PEDV 3CLpro)进行真核表达,并对其结构和功能进行生物信息学分析。根据GenBank上PEDV 3CLpro基因的序列设计并合成特异性引物,通过RT-PCR方法进行3CLpro基因的扩增,亚克隆至pEGFP-N1真核表达载体中,并转染至HEK 293T细胞,通过荧光观察和Western blot鉴定该蛋白的表达。并利用生物信息学软件对3CLpro进行序列分析、结构和功能预测。结果显示:PEDV 3CLpro能够在真核细胞中稳定高效表达,大小约为43 kDa,共编码302个氨基酸,分子式为C1446H2250N400O437S15,亲水性平均系数为0.058,不稳定指数为33.19,含有丰富的糖基化位点及磷酸化位点。其二级结构包含20.53%的α螺旋、38.41%的β折叠以及41.06%的无规则卷曲,对应的2个催化位点分别为41位的组氨酸(His)和144位的半胱氨酸(Cys)。上述结果为进一步研究PEDV 3CLpro在病毒与宿主互作中的生物学功能提供数据支撑。

主 题 词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) 3C样蛋白酶(3CLpro) 真核表达 生物信息学 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203969648...