一种新的简单有效的斑马鱼胚胎心脏富集和提纯方法

作     者：杨洁 娄气永 黄朱亮 李祖华 郑芳 YANG Jie;LOU Qi-yong;HUANG Zhu-liang;LI Zu-hua;ZHENG Fang

作者机构：武汉大学中南医院临床基因诊断中心/检验科湖北武汉430071 中国科学院水生生物研究所湖北武汉430072 

基　　金：国家自然科学基金项目(81472024) 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2015年第15卷第19期

页      码：3633-3636页

摘      要：目的:设计一个从斑马鱼胚胎得到大量完整高纯度心脏的新方法,从而用于测定早期心脏的基因表达。方法:收集上百颗心肌特异表达绿色荧光(cmlc2-GFP)的转基因斑马鱼的胚胎放入冰浴的10%胎牛血清L-15培养基中,用一个5 m L注射器反复抽吸迫使胚胎卵黄囊和心包腔破裂,在荧光显微镜下用微量毛细吸管收集游离的心脏,同时用单独的EP管收集身体组织,最后用荧光定量PCR技术(RT-PCR)验证提纯心脏组织的生物活性和特异性。结果:提取的大部分胚胎心脏的形态是完整的,约200颗胚胎心脏中提取了300 ng总RNA。提纯的活性心脏组织不仅高表达心脏特异性基因(cmlc2,myh6),而且几乎不表达非心脏组织的特异基因(six3b,ifabp)。结论:利用这个简便方法富集和提纯斑马鱼胚胎心脏可以得到高度纯化并具有生物活性的心脏组织。

主 题 词：斑马鱼胚胎 心脏纯化 cmlc2 myh6 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 071002[071002] 

D　O　I：10.13241/j.cnki.pmb.2015.19.009

馆 藏 号：203972577...