非洲猪瘟病毒CP204L基因的生物信息学分析、载体构建及蛋白表达

作     者：鲁中爽 许会会 蔡维北 武悦 杨莲花 王泽宇 王楠 徐一鸣 LU Zhongshuang;XU Huihui;CAI Weibei;WU Yue;YANG Lianhua;WANG Zeyu;WANG Nan;XU Yiming

作者机构：吉林和元生物工程技术创新研究开发有限公司吉林长春130102 吉林元和元生物工程有限公司吉林长春130102 吉林省动物疫病预防控制中心吉林长春130102 吉林省畜牧兽医工作总站吉林长春130102 

基　　金：吉林省新型动物疫苗研发项目长春新区医药健康重大科技研发平台项目(KCW-201802) 

出 版 物：《广东农业科学》 (Guangdong Agricultural Sciences)

年 卷 期：2020年第47卷第7期

页      码：128-136页

摘      要：【目的】非洲猪瘟病(African swine fever,ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)导致的,能引起猪高度致死的急性传染病。采用生物学手段制备检测试剂能更快、更有效地监测疫情,对ASF疫情的防控尤为重要。【方法】根据ASFV的CP204L基因CDS区序列设计特异性引物并进行PCR扩增,将目的基因片段与p EASY-T5连接构建克隆载体,利用生物信息学软件对蛋白进行生物信息学分析,用T4连接酶构建重组载体pET-32a(+)-CP204L,将成功构建的重组表达载体质粒转入感受态Rosetta(DE3)中,用1 mmol/L IPTG、37℃诱导表达8 h后进行SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达。【结果】生物信息学分析结果表明,P30蛋白是一种主要由无规卷曲α螺旋和β折叠组成的亲水和稳定蛋白,PCR扩增及测序比对结果证明成功构建了重组表达载体,SDS-PAGE电泳验证了在24.3 ku处有潜在的P30蛋白表达。【结论】通过生物信息学软件在分子层面分析了P30蛋白的理化性质及蛋白结构,P30蛋白的表达为制备ASFV血清学诊断试剂及诊断技术奠定了基础。

主 题 词：非洲猪瘟病毒(ASFV) 生物信息学 表达载体 诱导表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 0905[农学-林学类] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16768/j.issn.1004-874X.2020.07.016

馆 藏 号：203975716...