针对MTA1基因siRNA载体构建和沉默效应

作     者：杨松华 赵国强 董子明 YANG Song-hua;ZHAO Guo-qiang;DONG Zi-ming

作者机构：郑州大学基础医学院河南郑州450001 

基　　金：教育部"十五"211工程重点学科建设项目(教重办2002第2号) 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2008年第28卷第3期

页      码：366-369页

摘      要：目的构建针对人MTA1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰对食管癌细胞MTA1基因表达的抑制作用。方法设计MTA1的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测MTA1基因mRNA和蛋白表达的变化。结果把针对MTA1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析,插入片段正确;RT-PCR和Westernblotting检测显示,MTA1基因的表达水平明显降低,其中以481-499(GACCCTGCTGGCAGATAAA)为靶序列的siRNA沉默作用最强,MTA1蛋白几乎完全不表达。结论成功构建出沉默食管癌细胞MTA1基因表达的siRNA载体,为通过沉默MTA1基因的表达来减少恶性肿瘤侵袭转移提供了实验基础。

主 题 词：RNA干扰 MTA1 食管癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1673-4254.2008.03.012

馆 藏 号：203978616...