金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因的克隆、表达及其生物活性分析

作     者：郭海勇 赵雪 朱小雨 赵研彤 林依丹 施爽 李铄 计银铎 宋勤叶 GUO Hai-yong;ZHAO Xue;ZHU Xiao-yu;ZHAO Yan-tong;LIN Yi-dan;SHI Shuang;LI Shuo;JI Yin-duo;SONG Qin-ye

作者机构：吉林师范大学生命科学学院四平136000 河北农业大学动物医学院保定071000 美国明尼苏达大学兽医学院圣保罗55108 

基　　金：吉林省科技发展计划项目(No.20170101027JC) 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2020年第36卷第9期

页      码：696-702页

摘      要：目的体外表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,***)凝固酶Coa,评价其生物学活性。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因序列设计特异性引物,采用PCR方法从*** USA300 CA-MRSA 923株基因组中扩增coa基因片段,将其克隆至pET-24b(+)表达载体,构建重组表达质粒pET-24b-coa;将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化感受态细胞*** BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;通过SDS-PAGE和Western blot对表达的重组Coa(rCoa)进行鉴定,测定rCoa对人血液和兔血浆的凝固活性;最后用纯化的重组蛋白rCoa免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和Western blot分析其免疫原性。结果构建的重组质粒pET-24b-coa在*** BL21(DE3)中以包涵体形式表达rCoa,分子量约74.8 ku,与预期蛋白大小相符;rCoa在体外具有凝固人全血和兔血浆活性,能刺激小鼠产生高效价的抗Coa特异性抗体。结论成功地获得了具有良好凝固酶活性和抗原性的金黄色葡萄球菌凝固酶重组蛋白rCoa,为进一步深入研究***凝固酶Coa的功能及以Coa为靶点的抗金黄色葡萄球菌抑制剂和疫苗的研制奠定基础。

主 题 词：金黄色葡萄球菌 凝固酶 生物活性 克隆表达 

学科分类：1007[医学-药学类] 090601[090601] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2020.00.134

馆 藏 号：203979466...