单纯疱疹Ⅱ型病毒UL29基因shRNA表达载体的干扰效应

作     者：黄畅 潘晓瑜 袁俊杰 吕延成 HUANG Chang;PAN Xiao-yu;YUAN Jun-jie;LV Yan-cheng

作者机构：遵义医学院珠海校区广东省珠海市519040 

基　　金：贵州省科学技术基金(编号:黔科合J字2313号) 贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目[编号:黔省专合字(2009)122号] 

出 版 物：《实用医学杂志》 (The Journal of Practical Medicine)

年 卷 期：2014年第30卷第5期

页      码：691-694页

摘      要：目的:应用RNA干扰技术,针对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)UL29基因构建短发夹RNA重组表达载体,观察其对HSV-2的干扰效应。方法:针对HSV-2 UL29基因筛选出4条拟干扰靶位点序列,分别设计、合成4组靶向UL29基因shRNA的基因真核表达载体。通过脂质体转染到HEK293细胞。再将HSV-2接种到HEK293细胞中。采用终点滴定法检测病毒滴度,RT-PCR检测shRNA对转录水平的影响,Western-blot检测shRNA对蛋白质表达水平的影响。结果:终点滴定法结果显示UL29shRNA各组均可不同程度降低病毒感染滴度,与空白组(未转染重组表达载体)比较差异显著(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与空白组比较,4组抑制率分别为28.80%、59.95%、66.08%、36.27%,差异均具有显著性(P<0.05),shRNANC(不针对任何基因的序列)与空白组相比差异无显著性,其中以UL29shRNA1461组效果为最佳。Western-blot检测表明UL29shRNA各组ICP8蛋白表达水平比阴性对照组明显降低。结论:UL29shRNA能有效干扰HSV-2UL29基因的表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制。

主 题 词：疱疹病毒2型,人 RNA干扰 shRNA UL29基因 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-5725.2014.05.006

馆 藏 号：203981280...