苏禽黄鸡CVH基因真核表达载体构建及亚细胞定位

作     者：朱睿 张振韬 左其生 刘志永 韦光辉 李东 连超 张亚妮 李碧春 

作者机构：扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 

基　　金：国家自然基金(31272429) 江苏省研究生培养创新工程(CXLX12_0934) 

出 版 物：《中国畜牧杂志》 (Chinese Journal of Animal Science)

年 卷 期：2014年第50卷第9期

页      码：82-87页

摘      要：本研究通过PCR技术克隆苏禽黄鸡CVH基因的CDS区,分别构建真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH,并用pcDNA3.1-CVH载体免疫小鼠制备多克隆抗体。pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH分别转染COS-7细胞,进行间接免疫荧光实验和CVH-EGFP融合蛋白亚细胞定位,并通过RT-PCR、Western blot进一步检测蛋白的表达。结果表明:克隆出CVH基因的完整CDS,构建了真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH,成功制备了多克隆抗体,转染后观察CVH基因表达产物定位于细胞质中,RT-PCR和Western bolt分别检测到1 989 bp特异条带和100 ku的融合蛋白。真核表达载体制备的多克隆抗体特异性良好,效价为1∶200,CVH基因蛋白在细胞质中表达,为进一步探讨CVH基因的生物学特性建立基础。

主 题 词：CVH基因 亚细胞定位 EGFP 间接免疫荧光 多克隆抗体 黄鸡 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 090501[090501] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0258-7033.2014.09.018

馆 藏 号：203981355...