食管癌组织中HPV16型L2线性抗原基因的克隆及原核表达

作     者：张菊 阎小君 严泉剑 段杰 侯瑜 苏成芝 

作者机构：中国人民解放军第四军医大学全军基因诊断研究所陕西省西安市710033 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2001年第9卷第3期

页      码：273-278页

摘      要：目的通过聚合酶链方法,以特异引物,从感染人乳头瘤病毒的新鲜食管癌组织获得人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L_2保守区线性抗原片段的基因,并体外表达。获得具有抗原活性的原核表达蛋白,以探索研制低廉,方便及准确的人乳头瘤病毒感染的新型诊断试剂。方法在前人研究的基础上,经计算机检索,选定与食管癌高度相关的人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L_2N端的一段基因,采用特异引物及聚合酶链方法从多例人乳头瘤病毒感染的食管癌组织DNA模板中,获得人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L_2保守区线性抗原片段的基因,经克隆入测序载体验征DNA大小及序列后,将HPV16 L_2 DNA保守区线性抗原基因片段克隆入高效原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,初步以Western-blot测定表达产物的抗原性:与乳头瘤病毒抗体及感染者血清的反应活性。结果以我们设计的特异引物,从两例人乳头瘤病毒感染阳性的食管癌组织DNA模板中能得到预期大小的PCR产物,并能插入预定的克隆载体中测序,所得基因的序列符合目的基因的序列,且两例组织所得的目的DNA序列完全一致,其插入大肠杆菌表达载体能获得表达,且表达产物具有抗原活性,能与商品化的乳头瘤病毒抗体及乳头瘤病毒感染患者的血清发生抗原抗体反应。结论从食管癌组织中能检出人乳头瘤病毒HPV16型晚期表达基因区L_2特定片段的基因,该片段确具高度保守性。在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物,有抗原活性,有望用于流行病学检查,预警人乳头瘤病毒感染相关的癌症发生。

主 题 词：食管肿瘤 病毒学 乳头状瘤病毒 遗传学 基因病毒 基因表达 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-3079.2001.03.007

馆 藏 号：203981451...