人CC趋化因子配体17重组蛋白的原核表达、纯化及趋化活性分析

作     者：曹拓 魏准 彭湘明 CAO Tuo;WEI Zhun;PENG Xiang-ming

作者机构：广州市红十字会医院暨南大学医学院附属广州红十字会医院检验科广东广州510220 深圳北京大学香港科技大学医学中心生物医学研究所广东深圳518036 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2020年第33卷第10期

页      码：1128-1133,1142页

摘      要：目的原核表达人CC趋化因子配体17(CC chemokine ligand 17,CCL17)重组蛋白,纯化并分析其趋化活性。方法根据GenBank中登录的人CCL17基因序列(NM002987.2)设计特异性引物,扩增人静脉全血CCL17基因,将其PCR产物与pCold-TFM载体连接构建重组表达质粒pCold-TFM-CCL17,转化至*** BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达;表达产物经镍亲和层析,酶切移除融合蛋白的6×His-TF标签后,进行离子交换亲和层析纯化;凝胶过滤层析分析其聚合特性,分光光度法分析蛋白浓度,应用表达CCL17受体的Hut78细胞进行趋化试验。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组表达质粒pCold-TFM-CCL17构建正确;融合蛋白以可溶性形式表达;纯化的人CCL17重组蛋白相对分子质量约为11000,纯度达95%以上,其蛋白峰呈均匀、对称的单个色谱峰,色谱峰面积占总曲线面积95%以上,蛋白表达量≥6 mg/L,其可趋化Hut78细胞发生迁移。结论成功表达了可溶性、高纯度、高产量、具备一定趋化活性的人CCL17重组蛋白,为其工业化生产及科研应用提供了参考。

主 题 词：人CC趋化因子配体17基因 原核细胞 基因表达 纯化 趋化活性 分子伴侣 触发因子 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.003167

馆 藏 号：203986118...