结核分枝杆菌聚合酶螺旋反应检测方法的建立及效果评价

作     者：马晓光 石洁 徐行勇 朱岩昆 王少华 郑丹薇 孙国清 孙定勇 苏茹月 MA Xiao-guang;SHI Jie;XU Xing-yong;ZHU Yan-kun;WANG Shao-hua;ZHENG Dan-wei;SUN Guo-qing;SUN Ding-yong;SU Ru-yue

作者机构：河南省疾病预防控制中心结核病参比实验室郑州450016 广州迪澳生物科技有限公司 

出 版 物：《中国防痨杂志》 (Chinese Journal of Antituberculosis)

年 卷 期：2020年第42卷第10期

页      码：1121-1127页

摘      要：目的建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2X反应液中,在荧光定量PCR仪上于63℃反应45 min,通过荧光信号进行检测。通过对引物序列进行优化,筛选出最佳引物序列,并对其检测特异性和最低检出限进行评估。于2019年5—8月间从郑州市第六人民医院连续收集200例肺结核患者痰液样本(同一患者收集3份),对痰标本进行痰涂片、固体痰培养和PSR检测。以痰培养结果为参照,评价PSR对结核病患者的检测效能。结果通过引物序列优化,筛选出一套对结核分枝杆菌检测的PSR引物,使用该引物进行PSR的最低检出限可达到10~3菌落形成单位(CFU)/ml;检测特异性实验表明该方法与15株非结核分枝杆菌无交叉反应。200例肺结核患者中,痰涂片检测阳性48例,阳性检出率为24.0%(48/200);痰培养检测阳性83例,阳性检出率为41.5%(83/200);PSR方法检测阳性87例,阳性检出率为43.5%(87/200)。以痰培养结果为标准,PSR检测结核病的敏感度和特异度分别为96.4%(80/83)、94.0%(110/117),阳性预测值为92.0%(80/87),阴性预测值为97.3%(110/113),与痰培养检测方法基本一致(Kappa值为0.898)。结论PSR检测适用于结核分枝杆菌的快速筛查。

主 题 词：分枝杆菌,结核 痰 聚合酶螺旋反应 诊断 实验室技术和方法 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-6621.2020.10.019

馆 藏 号：203986250...