心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的绿色荧光蛋白表达载体的构建及鉴定

作     者：潘国栋 黄永章 郭凌郧 唐俊明 孔霞 YANG Qinglin 王家宁 PAN Guo-Dong;HUANG Yong-Zhang;GUO Ling-Yun;TANG Jun-Ming;KONG Xia;YANG Qing-Lin;WANG Jia-Ning

作者机构：郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所湖北十堰442000 Cardiovascular Research Institute Morehouse School of Medicine Atlanta Georgia 30310 USA 

基　　金：湖北省卫生厅重点项目(JX2B68) 湖北省教育厅青年基金(Q200524003) 湖北省自然科学基金(2005ABA079) 

出 版 物：《郧阳医学院学报》 (Journal of Yunyang Medical College)

年 卷 期：2006年第25卷第2期

页      码：70-73,F0003页

摘      要：目的:构建并鉴定心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的绿色荧光蛋白表达载体(MHC-EGFP),该基因只在心肌中特异性表达。方法:设计5’和3’分别具有SalI/H indⅢ酶切位点的EGFP引物,聚合酶链反应法(PCR)从pLEGFP质粒中扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的cDNA,插入pGEM-T Easy载体表达盒,构建pGEM-EGFP,Sa-lI/H indⅢ双酶切后回收729 kb片断,插入经相同酶切的含5.5 kb心肌特异性α肌球蛋白重链启动子的pNC26质粒,构建pMHC-EGFP。连接产物转化感受态DH5α,挑选克隆,PCR扩增鉴定,重组质粒经NotI酶切,回收7.2 kbMHC-EGFP表达盒。分离培养小鼠心肌细胞与骨骼肌成肌细胞。MHC-EGFP表达盒通过脂质体法分别转染心肌与骨骼肌成肌细胞。荧光显微镜观察转染细胞是否出现绿色荧光,以鉴定MHC-EGFP表达盒是否具有表达特异性。结果:EGFP cDNA正确插入pNC26质粒中αMHC启动子3’端。成功转染MHC-EGFP表达盒的心肌细胞出现绿色荧光,而转染的骨骼肌成肌细胞无荧光出现。结论:MHC-EGFP表达盒具有心肌特异性表达特性,为进一步监测干细胞向心肌分化研究奠定基础。

主 题 词：心肌特异性 肌球蛋白重链 启动子 增强型绿色荧光蛋白 干细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-9674.2006.02.002

馆 藏 号：203988762...