密码子优化的甲型H1N1流感病毒HA基因DNA疫苗在小鼠体内免疫保护效力研究

作     者：杨馥如 于海 王斌 黄梦 马继红 温峰 周艳君 童光志 

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 

基　　金：国家科技支撑计划重点项目(2010BAD04B03) 国家国际科技合作项目(2010DFB33920) 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2010JB01) 上海市科委基础研究重点项目(10JC1417300) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2012年第20卷第2期

页      码：36-41页

摘      要：为了提高甲型H1N1流感病毒HA基因DNA疫苗的免疫原性,本研究将流感病毒rPan09（HA和NA来自A/California/04/09,其余6个片段来自PR8的重组病毒）的HA基因通过人工合成的方法将其密码子优化为哺乳动物体内偏嗜性密码子opti-HA,同未优化的rPan09的HA基因分别与真核表达载体pCAGGS连接构成重组质粒pCA-optiHA和pCA-HA转染293T细胞,48 h后采用间接免疫荧光的方法检测HA基因的体外表达情况,结果显示重组质粒pCA-optiHA的蛋白表达量明显高于pCA-HA。为评价这两种重组质粒的免疫及保护效力,选取6~8周龄雌性BALB/c小鼠,将质粒pCA-HA、pCA-optiHA以100μg/只的剂量,进行后腿肌肉多点注射,同时设立空载体pCAGGS对照,共免疫3次,每次间隔2周。结果表明DNA疫苗pCA-optiHA可显著提高小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平。三免2周后用107.45EID50的rPan09采用滴鼻方式进行攻毒,用Real-time PCR及制作肺组织石蜡切片检测DNA疫苗的保护效力。结果表明,pCA-optiHA免疫组的保护效力明显高于pCA-HA免疫组。本研究为进一步研究和设计有效的甲型流感病毒DNA疫苗奠定了基础。

主 题 词：甲型H1N1流感病毒 HA基因 密码子优化 DNA疫苗 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-6422.2012.02.006

馆 藏 号：203989063...