鸭干扰素刺激基因的克隆、表达及其多克隆抗体的制备

作     者：黄惠兰 李文俊 谢梓民 杨惠湖 崔惠仪 黄淑坚 张雪莲 HUANG Huilan;LI Wenjun;XIE Zimin;YANG Huihu;CUI Huiyi;HUANG Shujian;ZHANG Xuelian

作者机构：佛山科学技术学院生命科学与工程学院佛山528231 

基　　金：广东省教育厅青年创新人才项目(2018KQNCX277) 佛山科学技术学院动物新发疫病防控重点实验室“开放基金”项目(KLPREAD201801-09、KLPREAD201801-08) 广东省现代农业产业技术体系创新团队(2019KJ137) 广东省教育厅预防兽医学重点实验室项目(2014KTSPT037) 广东省教育厅普通高校重点领域专项(乡村振兴)(2020ZDZX1004) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第47卷第11期

页      码：3713-3721页

摘      要：本研究旨在克隆、表达鸭干扰素刺激基因(interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)并制备其多克隆抗体。根据GenBank公布的绿头鸭IFIT5(登录号:KF956064)序列设计特异性引物,PCR扩增获得鸭IFIT5基因,并构建原核表达重组质粒pET-30a-IFIT5和pET-32a-IFIT5及真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5。原核表达获得鸭IFIT5重组蛋白后,进行SDS-PAGE分析,并利用镍柱亲和层析方法对重组蛋白进行纯化。以纯化的鸭IFIT5重组蛋白为免疫原制备兔抗鸭IFIT5多克隆抗体。利用间接ELISA测定多克隆抗体效价、用Western blotting鉴定其特异性;将真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5转化BHK21细胞,通过间接免疫荧光法鉴定多克隆抗体的反应性。结果表明:目的蛋白主要以包涵体的形式存在;制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体效价达1∶49600,可特异性识别鸭IFIT5重组蛋白,间接免疫荧光试验则表明纯化的多克隆抗体可特异性识别BHK21瞬时真核表达的鸭IFIT5蛋白。综上,成功克隆了鸭干扰素刺激基因IFIT5,制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体可用于鸭IFIT5蛋白的检测,可为鸭IFIT5蛋白的后续研究提供材料支撑。

主 题 词：鸭 干扰素刺激基因(IFIT5) 基因克隆 蛋白表达及检测 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2020.11.035

馆 藏 号：203990835...