西藏环状病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作     者：李楠 何于雯 孟锦昕 王静林 LI Nan;HE Yu-wen;MENG Jin-xin;WANG Jing-lin

作者机构：云南省畜牧兽医科学院/云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 

基　　金：国家重点研发计划项目(2016YFD0500303) 云南省科技厅重点基金项目(2019FA015) 国家自然科学基金项目(31660714) 云南省畜牧兽医科学院基础研究项目(2019RW006,2019RW007,2019RW009) 云南省科技人才和平台计划项目(2018HB046) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第50卷第11期

页      码：1360-1364页

摘      要：为了建立检测西藏环状病毒(Tibet orbivirus,TIBOV)的快速核酸检测方法,根据新分离的西藏环状病毒(DH13C120)Seg-10基因序列,设计了特异性引物及探针。通过优化反应条件,建立了检测西藏环状病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了检测。结果显示,该方法在2.31×10^8~2.31×10^2copies/μL质粒标准品浓度之间具有良好的线性关系,相关系数为0.999;组内与组间的变异系数均小于2%;最低检测下限为2.31×10^1copies/μL;对蓝舌病病毒、鹿流行性出血热病毒、阿卡斑病毒、盖塔病毒和流行性乙型脑炎病毒检测结果均为阴性,无交叉反应;对云南新分离的9株西藏环状病毒进行检测,拷贝数在3.23×10^5~1.54×10^6copies/μL之间,准确率为100%;对2013年采集自云南江城县的48份牛血液样品进行检测,检出西藏环状病毒阳性3份。结果表明,本研究建立的西藏环状病毒荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,适用于西藏环状病毒的快速检测,对西藏环状病毒的检测和流行病学调查提供了技术手段。

主 题 词：西藏环状病毒 荧光定量RT-PCR 检测方法 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 0905[农学-林学类] 09[农学] 071007[071007] 090501[090501] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0174

馆 藏 号：203990839...