无花果ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作     者：郭傲 高欢欢 陈默 郑雪莲 寇燕 郑国华 Guo Ao;Gao Huanhuan;Chen Mo;Zheng Xuelian;Kou Yan;Zheng Guohua

作者机构：福建农林大学园艺学院福州350002 福建农林大学园艺产品贮运保鲜研究所福州350002 

基　　金：福建农林大学科技创新专项基金项目(No.KFA18080A)资助 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2020年第18卷第22期

页      码：7458-7466页

摘      要：为建立稳定、可靠的无花果ISSR-PCR体系以及筛选出适用于该体系的ISSR引物,本研究以无花果为研究材料,采用正交设计试验与单因素试验相结合的方法,对影响ISSR-PCR反应的5个因素(Taq聚合酶, dNTPs, DNA模板,引物, Easy Taq Buffer (Mg2+))的工作浓度进行优化。在此基础上,从UBC公布的100条ISSR引物中筛选出16条扩增条带清晰、多态性好的引物,并筛选出其最佳退火温度。试验结果表明,5个因素对无花果ISSR-PCR反应均有极显著影响,影响程度大小依次为:Easy Taq Buffer (Mg2+)>引物>Taq聚合酶>DNA>dNTPs。最终确定的最佳反应体系为:反应总体积25μL,Taq聚合酶1.5 U,dNTPs 0.16 mmol/L,DNA 30 ng,引物0.3μmol/L,Easy Taq Buffer (Mg2+) 3.5μL。研究结果为今后无花果ISSR标记开发、遗传多样性研究等提供了理论依据。

主 题 词：无花果(Ficus carica) ISSR-PCR 反应体系 正交试验 单因素试验 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090201[090201] 

D　O　I：10.13271/j.mpb.018.007458

馆 藏 号：203993293...