微量酶联夹心杂交法定量检测hIL-8 mRNA PCR扩增产物

作     者：李招云 张黎明 吴晓宇 王乐见 LI Zhao-Yun;ZHANG Li-Ming;WU Xiao-Yu;WANG Le-Jian

作者机构：浙江省台州市中心医院台州318000 

基　　金：浙江省台州市科技局科技计划项目(051KY37)资助 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2006年第22卷第6期

页      码：555-557页

摘      要：目的:建立一种灵敏度高、特异性强、定量、精确、操作简便的微孔板酶联夹心杂交技术,定量检测人IL-8 mR-NA。方法:针对人IL-8 mRNA逆转录聚合酶链反应产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针,其中一条为捕获探针,5′端用活性氨基修饰,与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,“竖直”地包被在微孔板内;另一条检测探针的3′端标记生物素,和辣根过氧化物酶结合。提取人外周血单个核细胞总RNA,进行RT-PCR扩增IL-8 mRNA,双链DNA产物经热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交,加入检测探针与已杂交的产物结合,经亲和素-辣根过氧化物酶系统检测杂交信号。结果:该法灵敏度为检出16个循环的PCR产物、5×103个PBMCs中的IL-8 mRNA、检测PCR终产物的最高稀释倍数为1∶256阳性;特异性试验非目的扩增片段酶联杂交检测未检出阳性杂交信号;精密度试验CV为5.2%。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点,适合IL-8 mRNA PCR扩增产物的定量检测。

主 题 词：酶联夹心杂交 白细胞介素 定量检测 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203993524...