贵阳腐霉类枯草菌素蛋白酶基因的原核表达

作     者：段斯亮 于声 苏晓庆 DUAN Siliang;YU Sheng;SU Xiaoqing

作者机构：贵阳医学院生物学教研室 

基　　金：国家自然科学基金资助(30160003) 贵州省攻关课题(合同书编号:黔科合NY字3040) 

出 版 物：《贵阳医学院学报》 (Journal of Guiyang Medical College)

年 卷 期：2008年第33卷第3期

页      码：233-236,239页

摘      要：目的:实现贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)类枯草菌素蛋白酶(subtilisin-like protease,Pr1)基因在大肠杆菌中的活性表达,验证已获得的基因序列(YP1977)是否属于subtilisin-like protease基因家族成员。方法:(1)提取贵阳腐霉总RNA,以已获得的序列(YP1977)为模版设计引物,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增Pr1基因ORF片段;(2)构建含有Pr1基因ORF序列、绿色荧光蛋白基因ORF序列的重组质粒pTWIN1-Pr1-EGFP,转化表达菌株***2566,IPTG诱导菌株表达Pr1蛋白酶。结果:成功构建含有Pr1基因ORF序列、绿色荧光蛋白ORF序列的重组质粒pTWIN1-Pr1-EGFP,实现了Pr1基因在大肠杆菌中的活性表达。结论:证明已获得的DNA序列是贵阳腐霉的一个Pr1基因的编码区。

主 题 词：灭蚊 枯草杆菌蛋白酶类 逆转录聚合酶链反应 基因,真菌 贵阳腐霉 类枯草菌素蛋白酶 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071001[071001] 071010[071010] 07[理学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-2707.2008.03.004

馆 藏 号：203994124...