肿瘤坏死因子受体2编码基因重组质粒的构建及意义

作     者：卫娜 白瑞 车星星 王泽慧 肖传实 边云飞 WEI Na;BAI Rui;CHE Xing-xing;WANG Ze-hui;XIAO Chuan-shi;BIAN Yun-fei

作者机构：山西医科大学第二医院心内科太原030001 山西省医科大学第一医院 

基　　金：山西省科技攻关项目(20090311057-4) 

出 版 物：《中国药物与临床》 (Chinese Remedies & Clinics)

年 卷 期：2012年第12卷第6期

页      码：712-716页

摘      要：目的 构建真核表达质粒pcDNA6.0-TNFR2^196MET和pcDNA6.0-TNFR2^196ARG.方法 人工合成TNFR2196MET目的 片段,与pMD18-T simple 载体连接形成克隆载体,再通过设计突变引物,PCR定点突变扩增出含有突变位点的质粒,转化到肠埃希菌感受态细胞JM109中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增.抽提质粒进行测序鉴定,得到pMD18-T simple-TNFR^2196ARG.双酶切pMD18-T simple-TN-FR^2196MET、pMD18-T simple-TNFR^2196ARG及pcDNA6.0,将TNFR^2196MET、TNFR^2196ARG插入pcDNA6.0线性质粒,即构建成pcDNA6.0-TNFR^2196MET和pcDNA6.0-TNFR^2196ARG真核表达质粒,转化到Ecoli感受态中,筛选阳性克隆行菌液PCR和双酶切及测序鉴定.结果 酶切鉴定和测序分析验证TNFR2基因196MET和196ARG表达载体构建成功.结论 成功构建表达载体为下一步心血管疾病研究奠定了实验基础.

主 题 词：受体,肿瘤坏死因子,Ⅱ型 突变 遗传载体 心血管疾病 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-2560.2012.06.007

馆 藏 号：203995971...