紧密连接蛋白Occludin影响牛病毒性腹泻病毒感染

作     者：胡新艳 郭妍婷 赵新艳 李祯 陈俊贞 董文丽 贺渊秀 李泽宇 王万顺 冉多良 付强 史慧君 HU Xin-yan;GUO Yu-ting;ZHAO Xin-yan;LI Zhen;DONG Wen-li;HE Yuan-xiu;LI Ze-yu;WANG Wan-shun;RAN Duo-liang;FU Qiang;SHI Hui-jun

作者机构：新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31560328,31760742) 自治区研究生科研创新资助项目(XJ2019G152) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第40卷第11期

页      码：2119-2126页

摘      要：为了研究紧密连接蛋白Occludin(OCLN)在调控牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)胞内复制中的重要作用。使用Benchling平台设计OCLN的向导RNA(short guide RNA,sgRNA)序列,克隆至LentiCRISPR V2质粒中,包装慢病毒后感染牛肾细胞(madin-darby bovine kidney,MDBK),使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,使用Western blot检测OCLN敲除情况,建立OCLN敲除MDBK细胞系;于BVDV感染OCLN KO细胞不同时间,使用荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫荧光染色(immunofluorescence,IF)检测BVDV 5’非编码区(untranslated region,UTR)mRNA和双链RNA(double strand RNA,dsRNA)水平;使用Reed-Muench法测定BVDV感染OCLN KO细胞不同时间后病毒滴度;使用倒置显微镜观察BVDV感染OCLN KO和MDBK细胞不同时间后致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)情况;使用qRT-PCR检测OCLN KO细胞中BVDV吸附和内化情况。结果发现,与Scramble处理组相比,OCLN KO细胞中OCLN蛋白表达显著性降低,BVDV 5′UTR mRNA和dsRNA水平显著性降低,BVDV滴度显著性降低,BVDV感染造成的细胞CPE明显减弱,BVDV吸附和内化作用明显减弱。表明OCLN敲除后显著性抑制BVDV通过吸附和内化作用进入MDBK细胞,将为抗BVDV的新方法和技术建立提供依据和重要靶点。

主 题 词：牛病毒性腹泻病毒 紧密连接蛋白OCLN CRISPR/Cas9 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.11.07

馆 藏 号：203996048...