人β-地中海贫血CD41-42型突变基因慢病毒载体的构建和293T的转染

作     者：曾雅畅 李慕军 陈萍 陈悦 陈静 庞莉莉 

作者机构：广西医科大学第一附属医院广西地中海贫血防治重点实验室广西南宁530021 

基　　金：广西科技基础条件平台建设项目〔11-031-07 12-071-05〕 广西医疗卫生重点科研课题〔2012061〕 广西医科大学优秀博士学位论文培育项目〔YCBZ2012016〕 广西卫生厅自筹课题(桂卫自〔Z2013017〕) 广西高校人才小高地-辅助生殖技术与遗传性疾病的防治创新团队 

出 版 物：《中国妇幼保健》 (Maternal and Child Health Care of China)

年 卷 期：2014年第29卷第5期

页      码：767-769页

摘      要：目的:构建介导人β-地中海贫血CD41-42突变基因为目的基因的慢病毒载体,为基因治疗的细胞模型和转基因小鼠的建立提供基础。方法:抽提β-地中海贫血CD41-42突变纯合子患者的DNA,设计合成相应特异性引物,PCR扩增CD41-42突变基因,加上SphI和NotI两个酶切位点进行T载体克隆,通过筛选获得重组质粒。用限制性内切酶将目的基因片段和LV5慢病毒载体连接,转入感受态细胞,筛选获得慢病毒表达载体LV5-βCD41-42,并进行测序。将慢病毒载体转染293T细胞,包装病毒,测定病毒浓度。结果:通过PCR获得长度为2128bp带有SphI和NotI序列的目的基因。pUC57载体和慢病毒表达载体LV5连接,慢病毒表达载体LV5-βCD41-42构建成功,序列正确。结论:成功构建并包装含β-地中海贫血CD41-42突变基因的人慢病毒。

主 题 词：β-地中海贫血CD41—42突变基因 慢病毒 293T细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.7620/zgfybj.j.issn.1001-4411.2014.05.46

馆 藏 号：203996659...