鸭肝炎病毒PCR-ELISA检测方法的建立

作     者：耿昕颖 刘艳萍 张福君 王巍 毕彦晖 马红霞 高云航 GENG Xin-ying;LIU Yan-ping;ZHANG Fu-jun;WANG Wei;BI Yan-hui;MA Hong-xia;GAO Yun-hang

作者机构：吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 吉林正方农牧股份有限公司吉林梅河口135000 

基　　金：国家现代农业技术体系建设专项(CARS-43) 吉林省科技发展计划项目(20111820) 国家星火计划项目(2012GA-660003) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2016年第46卷第2期

页      码：161-166页

摘      要：为建立检测鸭肝炎病毒(DHV)的PCR-ELISA方法,根据DHV VP1基因序列设计1对分别标记生物素和地高辛的引物,采用固相杂交法,将生物素标记的探针固定在酶标板上,再与地高辛标记的产物进行杂交,并通过反复优化确定了10 mg/m L链霉亲和素包被液、10 g/L BSA封闭液、0.5 pmol/L探针、1∶4 000稀释的酶标二抗及最适杂交时间等最佳反应条件,建立了DHV PCR-ELISA检测方法。该方法与鸭肠炎病毒、鸭细小病毒和鸭疫里氏杆菌等无交叉反应,说明该方法特异性强;敏感性试验结果表明,PCR-ELISA最低能检出0.37 pg/L的DHV RNA,其敏感度比常规PCR高100倍。用该方法对50份雏鸭肝提取的RNA样本进行检测,阳性检出率为82%,较RT-PCR检出率高46%。结果表明,该PCR-ELISA方法具有特异、敏感、安全的特点,从而为鸭病毒性肝炎流行病学研究及临床诊断提供了新的途径。

主 题 词：鸭肝炎病毒 VP1基因 PCR-ELISA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2016.02.005

馆 藏 号：203997651...