摘要：应用Plackett-Burman(PB)设计法对影响XRN1蛋白表达的发酵培养基组分进行优化,选取的8个相关因子为酵母提取物、硫酸钙、MgSO4.7H2O、甘油、硫酸钾、磷酸、硫酸铵和氢氧化钾。统计分析表明,影响XRN1蛋白表达的关键因子为酵母提取物、硫酸镁和硫酸钾。在进行最陡爬坡试验逼近3个关键因素的最大响应区域的基础上,采用Box-Behnken Design法对发酵培养基组分进行优化,通过响应面法分析最佳条件为酵母提取物0.45%、硫酸镁0.38%和硫酸钾1.4%。在最佳培养条件下,工程菌生物量增加约0.5倍,蛋白表达量提高近40%。

摘要：为快速、灵敏、准确地同时检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病毒(PRV)的方法,本研究采用连接酶检测反应(LDR)-PCR和基因芯片技术建立一种新型检测方法。首先在3种病毒的保守区内分别设计一对LDR探针,两端各连接一段通用序列,依次进行LDR、通用引物荧光标记扩增和芯片杂交,同时比较引物标记和Cy5-dCTP标记方法的灵敏度。结果表明该方法可以特异地检测PCV2、PPV和PRV3种病毒,而对牛病毒性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪圆环病毒1型检测结果均为阴性;对3种病毒的最低检测限少于10个拷贝;Cy5-dCTP标记检测的灵敏度显著高于引物标记。利用建立的方法对41例临床样品进行检测,与普通PCR检测结果符合率为97.6%～100%。该方法的建立为基础研究和临床应用提供了技术平台。

摘要：应用寡聚核苷酸基因杂交技术建立一种快速可靠的检测猪瘟病毒的方法。在CSFV病毒保守序列5′非编码区设计了两对特异性引物，在此引物之间设计了特异的核苷酸探针（22—30mer）。通过PCR扩增Cy5标记的DNA片段与固定在玻片表面的探针杂交进行CSFV检测。该技术结合了PCR方法的高度敏感性和DNA-DNA杂交技术的选择特异性。并利用该方法对87例临床样品进行了检测鉴定，结果分析显示，可准确鉴别CSFV病毒，灵敏度与琼脂糖凝胶检测接近，可检测到的质粒最低浓度为0．4pg／μl。结果表明寡核苷酸基因芯片技术可有效地应用于CSFV临床诊断和分子流行病学调查。

摘要：本研究应用寡聚核苷酸基因杂交技术建立了一种快速可靠的检测猪圆环病毒(PCV)基因型的方法。在PCV保守序列复制酶基因内设计了2对特异性引物,在此物之间设计了2种基因型特异的核苷酸探针(22～30mer)。通过PCR扩增Cy5标记的DNA片段与固定在玻片表面的探针杂交进行PCV基因分型。该技术结合了PCR方法的高度敏感性和DNA-DNA杂交技术的选择特异性。利用该方法对58例临床样品进行了检测鉴定。结果显示,该技术能准确鉴别PCV病毒基因型。且其灵敏度是凝胶电泳的5倍。试验结果表明寡核苷酸基因芯片技术可有效地应用于PCV临床诊断和分子流行病学调查。

摘要：为准确特异灵敏地检测猪细小病毒(PPV),建立一种新的LDR-PCR方法。首先在病毒的保守区内设计一对LDR探针,LDR探针两端各连有一段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果。以标准质粒为模板,通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法。结果表明,可以特异地检测PPV,与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应;最低检测限为102个拷贝。利用建立的方法对41例临床样本进行检测,14份样品PPV阳性,与普通PCR检测结果符合率为97.6%。

摘要：为了建立一种可同时检测区分猪瘟病毒(CSFV),猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的寡核苷酸基因芯片方法,本研究针对每种病毒设计了4条～6条寡核苷酸探针,检测低限为1.6×104PCV-2拷贝数/μL,1.6×104CSFV拷贝数/μL,1.6×105PRRSV拷贝数/μL,比琼脂糖凝胶灵敏约10倍。利用建立的寡核苷酸基因芯片方法对76个仔猪样本进行了检测,检出了3种病毒的存在,其中25个样本(32.9%)同时感染了2种以上病毒。结果表明寡核苷酸基因芯片检测是一种快速、灵敏和高效的猪只混合感染病毒的病原学诊断方法。

摘要：改革目前生物化学实验中"同工酶"的实验方法,设计了等电聚焦电泳分析西方蜜蜂苹果酸脱氢酶Ⅱ同工酶及基因型的实验。等电聚焦电泳完全分离苹果酸脱氢酶Ⅱ同工酶的不同酶谱条带,电泳图谱清晰,并能同时分析同工酶型和基因型。该实验综合性强,实验结果清晰、直观。

摘要：RNA芯片作为研究ncRNA的主要技术之一,已受到广泛关注。然而因RNA芯片中靶序列的单链特征,使得RNA芯片的探针设计比DNA复杂。本研究对加强型绿色荧光蛋白(EGFP)RNA序列进行覆瓦式探针设计,制作了RNA原位合成芯片,研究探针/靶序列杂交双链ΔG和Tm、靶序列二级结构以及探针的末端碱基对RNA芯片杂交信号强度的影响。结果表明,探针/靶序列杂交双链ΔG和Tm相同的探针间的杂交信号存在较大差异,探针/靶序列杂交双链ΔG和Tm与RNA芯片杂交信号之间未发现明显的规律性;靶序列二级结构的探针PT-sc参数与芯片杂交信号强度间呈较好的线性关系;探针5’末端碱基组成对芯片杂交信号强度也有影响,5’末端碱基为G/C的探针杂交信号总体上高于其邻近的5’末端碱基为A/T的探针的杂交信号,为RNA芯片的探针筛选提供一定的理论基础。

摘要：为了适应创新型人才培养的需要,在结合多年来实验课程体系改革的基础上,对综合性和设计性实验项目进行有机整合,构建微生物菌种(植物内生菌)资源筛选——本科探究式实践教学平台,形成相互联系、彼此衔接的探究式实验项目。突出学生自主选题和设计探究式实验项目,培养学生的创新意识、创新技能和科学素养。通过课内实验教学和课外科技创新活动的有机结合,进一步巩固和提升了学生的综合实践技能,取得了较好的教学效果和示范效应。