摘要：在对苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)高毒力杀虫菌株 4 0 718产毒单因子培养条件试验的基础上 ,采用正交设计试验培养和结合杀虫毒力测定的方法 ,对该菌株产毒的发酵条件进行了研究。结果表明 :在摇瓶发酵培养时 ,培养基C/N比为 3 7,发酵起始 pH为 7 8～ 8 0 ,发酵温度为 (2 9± 1)℃ ,15 0r/min摇瓶培养 43～ 44h ,接种量为 6%～ 8%时 ,该突变菌株杀虫毒力与原始菌株相比提高了 7 5倍。连续传代培养 10次 。

摘要：为了提高杀虫蛋白Cry1和Cry2产量,首先采用Plackett-Burman设计筛选出发酵培养基中影响苏云金芽胞杆菌4.0718表达毒蛋白Cry1的显著性因子为黄豆饼粉和MnSO4?H2O,Cry2的产量在该配方中无显著性影响因子。然后利用最速上升实验逼近Cry1最大产出区域,找到后续试验中心点。最后通过响应面优化得到黄豆饼粉和MnSO4?H2O的最佳浓度为11.5g/L和0.02g/L,使Cry1和Cry2产量分别达到0.32mg/mL和0.11mg/mL,比原优选配方产量提高了两倍多。该优化配方发酵液对棉铃虫的半致死浓度(LC50)为1.09μL/mL,杀虫活性比原优化配方显著提高。

摘要：培养专业加外语的复合性人才,创新双语教学模式是提升教学效果的关键。经十三年生物化学双语教学的实践探索:注重钻研、吃透原版英文教材,列出重要专业英文词汇、音标和常用句型,写出英文教案;激发学生自主学习,课前引入问题、预习回答问题、师生互动讨论,重难点详讲、归纳总结解惑、习题巩固要点和实践创新应用,优化学科知识和课程教学设计;客观评价、综合分析其教学效果,形成了受学生欢迎、效果好、有一定创新特色的双语结构教学模式。

摘要：蛋白质的结构数据量目前还远落后于其序列数据量。本文利用蛋白质数据库和CLUSTAL W、SWISS-MODEL、ExPASy工具等对已知序列的9种Cry1A的一级结构及基本性质、二级结构、三级结构进行预测分析对比,发现其序列和结构的均高度相似,从而找出序列上的主要突变区域和三维结构的差异部位,有助于进一步认识Cry1A蛋白的作用模式和功能异同、分析其进化关系,并为重新设计Cry1A蛋白提供参考。

摘要：已经证实苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)伴孢晶体结合 2 0kbDNA ,但其序列特异性及作用有待进一步研究阐明。研究了选择性溶解Bt 4 0 718菌株Cry1类原毒素所形成的菱形伴孢晶体 ,从中抽提出与其结合的 2 0kbDNA。经NdeⅠ酶切消化后亚克隆构建文库 ,通过PCR RFLP及测序筛选出含cry1Ac基因的转化子。然后设计引物PCR扩增出cry1Ac基因的ORF并与pET30a连接 ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,高效表达了 14 1kD蛋白。表达蛋白占总蛋白量的 5 0 %以上 ,且 90 %以上以包涵体形式存在。利用穿梭载体pHT30 4构建表达质粒pHTX4 2 ,电转化Bt无晶体突变株XBU0 0 1,获得重组菌株HTX4 2 ,经SDS PAGE分析 ,cry1Ac基因得到强表达 ,蛋白质定量分析显示目的蛋白量占总蛋白量的 79 2 8% ,且其在细胞中累积达细胞干重的 6 4 13% ,比文献报道的 2 5 %左右高了 1倍以上。原子力显微镜 (AtomicForceMicroscopy ,AFM)检测显示 ,目的基因在大肠杆菌 (E .coli)中表达的包涵体呈不规则形状且较小 ,而在无晶体突变株中表达的晶体呈典型菱形晶体 ,大小约为 1 2 μm× 2 0 μm。生测结果显示 ,包涵体与晶体对小菜蛾 (Plutellaxylostella)幼虫均有高效杀虫活性。本研究为构建高效杀虫工程菌及进一步阐明Bt伴孢晶体中 2 0kbDNA分?

摘要：通过优化刺糖多孢菌发酵合成多杀菌素培养基成分,改善培养条件,从而提高多杀菌素产量.在单因素以及Plackett-Burman试验设计的基础上,采用Box-Behnken试验设计方法对发酵培养基组分中的玉米浆、可溶性淀粉、丙酸钠进行研究,运用遗传算法优化的BP神经网络建立多杀菌素产量与培养基组分浓度之间的预测模型,采用循环算法对此模型进行寻优,得到三种组分的最佳配比为:玉米浆7 g/L、可溶性淀粉16 g/L、丙酸钠2 g/L,多杀菌素产量达到(550.22±3.84)mg/L,采用上述方法优化后的培养基使得多杀菌素产量比原始培养基产量(225mg/L)提高145%.本研究结果可为培养基优化提供一种有效的建模方法.

摘要：在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28 a(+),在大肠杆菌中表达了CDEP2蛋白.

摘要：为了获得高活力抗肿瘤工程菌Escherichia coli Nissle 1917(EcNA)微胶囊制剂,对EcNA进行发酵培养基优化和微胶囊制剂的制备。首先利用单因素试验考察甘油、酵母提取物、蛋白胨及玉米浆对EcNA菌体浓度的影响,在以Box-Behnken设计试验的基础上,分别建立响应面模型和BP人工神经网络结合遗传算法模型优化发酵培养基组分,最后采用挤压法以海藻酸钠和壳聚糖为复合壁材,将EcNA包埋在微胶囊中。结果显示,最佳优化配方为甘油7 g/L,蛋白胨28.75 g/L,酵母提取物86.25 g/L,玉米浆10 g/L,K2HPO4 16.43g/L,KH2PO4 2.3 g/L,发酵液菌体浓度OD600达到12.92,与未优化相比提高了3.86倍。通过正交试验得到最佳制备条件:海藻酸钠0.035 g/mL,壳聚糖0.004 g/mL,壁芯比2:2,氯化钙0.05 g/mL。结果表明,BP人工神经网络结合遗传算法在培养基优化中具有显著的优越性,制成的EcNA微胶囊有良好的耐酸性和肠溶性。

摘要：在基因库中比对14种cry1Ac基因序列,发现了同源性很高的上游启动子区域和下游终止子区域。根据这一同源序列设计引物,从B t4.0718中扩增出包含双启动子和终止子的4.2 kb片段,用PCR-RFLP检测确定其中含有cry1Ac基因。然后将此片段克隆到穿梭载体pHT304中,转化大肠杆菌DH5α和B t无晶体突变株XZM-101。同时,利用原子力显微镜观察发现重组菌株BXZM34能够产生菱形晶体。