摘要：背景:表皮生长因子和胰岛素都主要通过PI3K通路和MAPK通路进行信号转导,但各自的生理功能不同。目的:从细胞整体水平对比分析小鼠肝细胞内胰岛素与表皮生长因子信号转导磷蛋白质组的动力学行为差别,以此找出二者关键性的信号蛋白。设计、时间及地点:随机分组设计的对比观察实验,于2005-07/2006-04在泸州医学院分子生物学实验室完成。材料:实验用肝细胞来源于昆明种封闭群乳小鼠。方法:选取细胞长势相当的肝细胞,采用放射性同位素(32P)对其进行标记,标记后按随机数字表法分为3组,空白对照组、表皮生长因子刺激组(给予10μg/L表皮生长因子)及胰岛素刺激组(给予100nmol/L胰岛素)。主要观察指标:表皮生长因子、胰岛素分别作用0,5,20,60,120min,采用双向电泳技术分析比较表皮生长因子与胰岛素分别介导的磷酸化蛋白质组的动力学行为,即磷酸化水平。结果:参与两者信号转导的磷蛋白质种类没有多大差异,大多数信号磷蛋白磷酸化水平的动力学行为也表现为一致性,但有4个蛋白点其磷酸化水平随时间变化趋势明显不同。结论:胰岛素与表皮生长因子在同一细胞内参与信号转导的个别信号蛋白其磷酸化水平的动力学行为差别较大,估计这些蛋白就是导致表皮生长因子与胰岛素最终生物学活性的关键蛋白。

摘要：目的对肺癌原位接种的小鼠模型,设计并建立了11色的免疫细胞分类方法,对肿瘤微环境中的T细胞、巨噬细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞进行更加细致的分型,从而获得有关影响肿瘤细胞进展的研究手段。方法建立11色的上皮细胞、T细胞、巨噬细胞和NK细胞的标志物荧光基团的搭配方案,对有免疫功能的小鼠血液样本进行鉴定。进一步原位接种PC-9细胞于裸鼠体内,通过该搭配方案分析鉴定M1型、M2型巨噬细胞,以及不同成熟程度的NK细胞。结果11色免疫细胞的搭配方案能够使各种标志物发挥到最大的荧光效应,减少荧光串色。对小鼠血液标本,通过流式细胞学分析可以得到准确的淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞的分类和分型。对原位移植瘤样本,能够更精准的区分肿瘤细胞和各种免疫细胞及细胞亚型。采用溶瘤病毒干预措施,发现干预后的免疫细胞各个分型之间差异有统计学意义。结论在原位移植瘤的模型中,该11色免疫细胞的流式荧光抗体搭配方案可以对肿瘤微环境中的多种免疫细胞进行精确分类,为研究不同免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用提供了有效的手段,并可以应用于大量的肿瘤微环境研究中。