摘要：目的研究凝血因子Ⅴ（FⅤ）基因编码区单核苷酸多态性与静脉血栓栓塞症的关系。方法检测静脉血栓患者及正常对照者血浆中的FⅤ的活性（FⅤ：C）（一期法）及FⅤ抗原（FⅤ：Ag）（ELISA法），用Premier5软件设计5对与静脉血栓症相关的基因多态性（Asp79His、Arg306The、Arg306Gly、Arg506Gln、Ile359The和His1299Arg）引物，进行PCR扩增、产物纯化、限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RFLP）检测。对所发现的多态性用直接测序法证实，并对含多态性的标本用直接测序法进行FⅤ基因全部外显子编码区的筛查。结果静脉血栓组（VTE组）FⅤ：C（106．9±28．0）％，FⅤ：Ag（110．4±33．3）％；对照组FⅤ：C（102．4±30．9）％，FⅤ：Ag（102．1±24．1）％。VTE组FⅤ：Ag明显高于对照组（P〈0．05），FⅤ：C两者之间差异无明显统计学意义。VTE组和对照组均无Asp79His、Arg306The、Arg306Gly、Arg506Gln和Ile359The多态性，5例静脉血栓栓塞症患者及3名正常人含有His1299Arg多态性。5例静脉血栓栓塞症患者同时伴有Met1736Val多态性，其中3例尚含Asp2194Gly多态性。结论FⅤ含量增高与静脉血栓栓塞症相关，静脉血栓栓塞症与Asp79His、Arg306The、Arg306Gly、Arg506Gln和Ile359The多态性基本无关；His1299Arg在VTE组中的分布频率高于对照组，但差异无统计学意义。Hisl299Arg与Metl736Ⅴal和As02194Gly多态性在人群中有连锁不平衡特性。

摘要：目的对两个遗传性异常纤维蛋白原血症家系的突变纤维蛋白原（Fg）进行功能研究。方法常规筛查凝血功能；Fg抗原和活性分别用免疫比浊法和Clauss法测定；抽提DNA，对Fg3个基因（FGA、FGB和FGG）以及抗凝血酶基因（AT3）所有外显子及侧翼序列进行PCR扩增、测序及分析；采用常规血栓弹力图（TEG）和功能性FgTEG检查对家系B先证者及其父亲进行凝血功能的综合评价及血浆功能性Fg评估；应用Westernblot检测血浆赡肽链分子量；采用赡动态聚集曲线和纤维蛋白溶解曲线实验检测血浆Fg的功能。结果2例先证者凝血酶原时间（。rT）和爬虫酶凝固时间（RT）明显延长，Fg活性仅为0．5∥L和0．6g／L，但其抗原均正常，分别为2．32g／L和2．66g／L。两个家系先证者均存在1链Arg275His杂合突变，家系B先证者的祖父和姑母同时检出AT3g．5876T〉C（Serll6Pro）杂合突变。家系B先证者及其父亲TEG检测结果中α值分别接近和低于正常参考值范围下限，但最大波幅（MA值）均为正常；在功能性FgTEG检测中，MA值明显偏低。Fg动态聚集曲线中先证者和家系患者的起跳时间明显延长、峰值明显降低。纤维蛋白溶解曲线中多数患者的纤维蛋白在特定时间内不能被纤溶酶原完全溶解。结论首次发现遗传性异常纤维蛋白原血症合并AT缺陷的患者。1链Arg275His突变使Fg在纤维蛋白单体聚合以及纤维蛋白溶解方面出现异常。联合应用常规TEG和功能性TEG检测，可以更好地评估异常纤维蛋白原血症患者Fg的功能。

摘要：目的对遗传性出血性毛细血管扩张症(HHT)家系做临床诊断并探索其分子发病机制。方法收集3个疑似HHT患者的病史、临床表型和家族史等基本资料,对患者凝血功能相关指标做实验室检测,排除凝血系统异常。采用直接测序法对HHT相关基因ENG和ACVRL1做序列分析,寻找致病突变;将所发现的突变重新扩增PCR产物反向测序以证实。比对新的基因突变,筛查100个正常人、单核苷酸多态性数据库、人类基因突变数据库和HHT基因变异数据库以排除多态性。结果 3个家系中均存在出血、毛细血管扩张、阳性家族史等HHT典型临床特点,凝血功能均未发现异常。基因测序显示突变均存在于ACVRL1基因上,3个家系携带的突变分别是g.18349C>A,***462X、g.12876G>T,***281X和g.12079G>T,***228Phe,其中g.18349C>A,***462X和g.12079G>T,***228Phe为新发致病突变。在100个正常人和数据库中均未发现相关突变;3个突变均导致ACVRL1基因编码的ALK-1蛋白激酶功能区内的氨基酸发生改变。结论在这3个有典型HHT表现的家系中,发生在ALK-1蛋白激酶功能区内氨基酸的改变是其分子水平的致病原因。

摘要：目的对2例遗传性血管性血友病家系进行临床表型诊断和基因型分析，探讨其分子发病机制。方法分别采用出血时间、活化部分凝血活酶时间、瑞斯托霉素诱导的血小板聚集试验、血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）瑞斯托霉素辅因子试验、vWF抗原、vWF活性、vWF胶原结合实验和多聚体分析对2例遗传性血管性血友病先证者和家系成员进行表型诊断。抽提先证者外周血基因组DNA，PCR法扩增VWF基因的52个外显子及侧翼序列，通过直接测序分析VWF基因突变。结果2例先证者出血时间和活化部分凝血活酶时间均延长，血浆瑞斯托霉素诱导的血小板聚集、VWF瑞斯托霉素辅因子活性、vWF抗原、vWF活性、vWF胶原结合功能均显著降低，多聚体分析显示2例先证者多聚体均缺无，先证者A基因分析发现第17外显子的纯合插入突变g．82888—82889insCATG，导致740位蛋氨酸往后编码10个异常氨基酸后终止。先证者B基因分析发现第20外显子g．94865G〉A（Trp856X）和第28外显子g．110698—110699delinsG导致1481位甘氨酸往后编码42个异常氨基酸后终止的复合杂合突变。结论g．82888—82889insCATG纯合插入突变和g．94865G〉A（Trp856stop）与g．110698—110699delinsG的复合杂合突变分别导致了2例先证者的3型遗传性血管性血友病。

摘要：目的对F8基因大片段缺失所导致的重型血友病A患者进行基因断裂点分析，探讨其分子发病机制。方法筛查患者凝血功能相关指标，明确血友病A表型诊断。采用长距离PCR及序列特异PCR进行内含子22和内含子1倒位的检测，并对F8基因的所有外显子及其侧翼序列直接测序。基因步移的方法确定F8基因断裂点。断裂点特异双重PCR对携带者进行诊断。多重荧光PCR法检测6个微卫星DNA位点（F8Up226、F8Up146、F8Int13、F8Int25、F8Down48、DXS1073）多态性对家系进行遗传连锁分析验证。结果先证者FⅧ活性〈l％，诊断为重型血友病A。患者F8内含子22及内含子1倒位均为阴性。F8基因4～7号外显子多次PCR扩增后电泳未见相应条带，其余外显子测序未发现突变。基因步移PCR扩增产物经测序发现F8基因共缺失27685个碱基，并在断裂点融合处存在2个微小同源碱基，且插入7个碱基（CTCTrCC）。断裂点特异性双重PCR结果显示胎儿及该患者的女儿均为缺失携带者，与基因连锁分析结果相吻合。结论F8基因4—7号外显子缺失导致患者发生重型血友病A，微小同源介导的末端连接等机制可能介导了缺失的发生。断裂点特异双重PCR为携带者的诊断提供了一个可靠的方法。

摘要：目的分析3例遗传性血管性血友病（vWD）患者的表型和基因型，探讨其分子发病机制。方法采用出血时间（BT）、APTT、瑞斯托霉素诱导的血小板聚集试验（RIPA）、血管性血友病因子（vWF）瑞斯托霉素辅因子活性（vWF：Rco）、vWF抗原（vWF：Ag）、vWF活性（vWF：A）、vwF胶原结合试验（vWF：CB）和多聚体分析对3例vWD患者进行表型诊断，通过血栓弹力图检测分析全血凝固功能。提取外周血基因组DNA，测序分析vwF基因突变情况。结果3例先证者APrr、BT均延长，vWF：Rco、vWF：Ag、vWF：A和vWF：CB均不同程度减低，除先证者A外，先证者B、C血浆RIPA明显减低，多聚体分析结果显示先证者A和c血浆多聚体分布基本正常，先证者B大相对分子质量多聚体缺失。先证者C血栓弹力图检测全血呈明显低凝状态。基因测序发现，先证者A、B和c分别存在26号外显子g．106782G〉T（Cysll30Phe）、28号外显子g．110988G〉A（Glyl579Arg）和28号外显子g．110373C〉T（Arg1374Cys）的杂合错义突变。结论3例先证者表型诊断分别为1型、2A型和2M型vWD，Cvsll30Phe、Glyl579Arg和Arg1374Cys的杂合错义突变分别为3例先证者的致病基础。