摘要：冠状病毒家族成员众多,主要感染哺乳动物和禽鸟类,给人类和动物的健康带来了极大危害。病毒对细胞表面受体的结合和内吞方式,决定病毒的宿主范围、组织嗜性和发病机理;此外,研究病毒的入胞途径不仅有助于我们认识病毒的生活周期,还对病毒性感染的预防和治疗具有重要意义。本文总结归纳了近十年来冠状病毒入胞途径的研究进展:多数冠状病毒可通过网格蛋白依赖型内吞、小窝蛋白依赖型内吞、巨胞饮以及网格蛋白/小窝蛋白非依赖型内吞途径进入细胞,到达早期内体、晚期内体或溶酶体等处发生膜融合,释放病毒基因组进入细胞质。病毒的内吞途径可作为广谱抗病毒药物设计的靶点。

摘要：尽管新型冠状病毒出现至今,已造成三次严重的肺炎疫情,但在冠状病毒的治疗方面,尚无有效的疫苗和靶向药。2019年底至2020年初,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)在中国大地上肆虐,如何防控和治疗SARS-CoV-2的感染,无疑是目前亟需解决的最重要问题。病毒编码的膜孔蛋白可在宿主细胞膜上形成选择性离子通道,决定病毒的致病性,是抗病毒药物设计的靶点。冠状病毒的小包膜蛋白E不但参与病毒的组装和出芽,而且在细胞膜上形成离子通道,并能激活炎症小体,促进炎症反应,是多功能病毒膜孔蛋白。本文介绍了靶向病毒膜孔蛋白的药物使用情况,并重点阐述了冠状病毒E蛋白的功能研究和药物研究进展,为SARS-CoV-2的治疗提供参考。

摘要：根据GenBank中的牛型布鲁氏菌基因序列,设计了1对特异性引物,以A19菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出外膜蛋白OMP2b的全长基因,将OMP2b经T-A克隆后进行了序列测定和分析。结果表明,OMP2b全长1 128bp,编码376个氨基酸。将OMP2b定向克隆至表达载体pCold TF中,构建重组表达质粒pCold TF-OMP2b,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白His-OMP2b。SDS-PAGE分析结果显示,His-OMP2b约为93ku,与预期大小一致,表明His-OMP2b表达成功;经Wes-tern-blot分析,His-OMP2b能与牛型布鲁氏菌A19株全菌兔抗血清发生特异性反应,表明His-OMP2b具有免疫反应性。

摘要：禽流感病毒在世界范围内广泛流行,给养禽业造成了巨大的经济损失,有效的疫苗接种策略可以帮助预防和控制该疾病。抗原转换和漂移是流感病毒发生变异的两种主要机制。NA蛋白是流感病毒的表面纤突之一属于Ⅱ型糖蛋白,在病毒成熟时发挥神经氨酸酶的作用进而有利于病毒的成熟和释放,并在调控受体结合、病毒出芽等方面发挥着重要的作用。抑制NA蛋白活性具有预防和治疗疾病作用的事实证实NA蛋白是一个抗病毒的有效靶点。此外基于NA蛋白设计流感疫苗,具有免疫保护期更持久和保护范围更广的优势。

摘要：【目的】建立禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)黏附相关基因、侵袭及毒素相关基因、抗血清存活相关基因及铁转运相关基因的多重PCR方法,实现禽致病性大肠杆菌毒力基因的简便、快速检测。【方法】根据GenBank公布的基因序列,设计合成18对特异性引物,通过条件优化,建立四组多重PCR体系,并通过模板倍比稀释检测各组多重PCR的灵敏性。利用多重PCR检测100株APEC毒力基因的分布,验证多重PCR方法的可行性。【结果】根据PCR扩增片段大小判定,上述四组多重PCR体系均能同时扩增出该组中的各个毒力基因,且灵敏度分别为:103CFU、103CFU、105CFU、105CFU细菌和1ng、1ng、10ng、10ng DNA。100株APEC的毒力因子检测结果显示,多重PCR和单基因PCR结果一致。【结论】建立的四组多重PCR方法能够简便、快速地检测禽致病性大肠杆菌的毒力基因,可用于毒力基因的鉴定以及流行病学调查。

摘要：为了建立鸭先天免疫受体核苷酸寡域1（NOD1）的荧光定量RT-PCR检测方法,依据GenBank中鸡NOD1序列设计特异性引物,克隆获得鸭NOD1序列,设计鸭NOD1、凋亡相关碱性蛋白（ARBP）荧光定量RT-PCR特异性引物,以鸭脾脏mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测鸭先天免疫受体NOD1转录水平的荧光定量RT-PCR方法.结果显示,建立的荧光定量RT-PCR方法对NOD1 mRNA的最低检测量为102拷贝,在1012～102拷贝范围内线性关系很好,R2≥0.999.该方法具有良好的特异性和重复性.应用于感染鸭疫里默氏杆菌Yb2株樱桃谷鸭脾脏中NOD1转录水平的检测,表明该方法可用于临床检测且适用性良好.

摘要：NDV的P基因能够通过RNA编辑机制编码3种病毒蛋白P、V和W。为了初步确定新城疫病毒P、V和W的功能结构域及其在P基因中位置,对这3种具有相同N端不同C端的病毒蛋白进行生物信息学分析。分别设计针对基因Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅶ型以及class Ⅰ NDV毒株P基因的引物。RT-PCR获得5种基因型NDV P基因的正确序列。通过核苷酸序列预测P基因表达产物的氨基酸序列,并进行二级结构预测和三级结构模拟。将SV5 V蛋白空间结构作为模板,从而分析获得了NDVP/V/W基因编码产物的二级结构以及部分空间结构。综合各种分析数据,预测P蛋白辅助N蛋白折叠的结构域位于N端前50 aa内;介导P蛋白四聚体形成的coiled-coil结构位于221-290 aa范围内;介导P蛋白与基因组的作用的X结构域位于291-392 aa范围内。V蛋白的C端结构域的编码区域位于P蛋白132-239 aa编码区域内。

摘要：为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(***)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对*** SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了*** SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特异性产物Tm值为78.2℃～78.5℃,最低可检测到49.5 fg/μL(16.5拷贝)的阳性质粒。标准曲线的相关系数为0.99。与其他常见的产SEB的***、产SEC的***、无乳链球菌、大肠杆菌、嗜热链球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌DH5α及JM109均无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和敏感性,为牛乳中***的快速检测提供了新的技术手段。

摘要：为了建立一种可以同时鉴定大肠杆菌O_(8)、O_(9)、O_(149)与O_(157)血清型的快速高效多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中大肠杆菌O_(8)、O_(9)、O_(149)、O_(157)血清型的O抗原合成基因簇特异性靶标基因序列,设计合成4对PCR引物,优化引物浓度及反应条件,建立多重PCR检测方法。然后,分析多重PCR方法的特异性、敏感性,并利用建立的多重PCR方法检测大肠杆菌临床分离株验证该方法的可靠性。特异性结果显示,多重PCR方法可有效鉴定大肠杆菌O_(8)、O_(9)、O_(149)、O_(157)血清型,而检测其他血清型大肠杆菌及菌种时无扩增条带,表明多重PCR方法具有较好的特异性。敏感性结果显示,多重PCR方法检测大肠杆菌O_(8)、O_(9)、O_(149)、O_(157)血清型的菌液和DNA的最低检测限分别为10^(5)CFU、10^(5)CFU、10^(3)CFU、10^(3)CFU和1 ng、100 pg、10 pg、10 pg。临床分离株检测结果显示,与传统血清凝集试验相比,多重PCR方法更准确、可靠。本研究成功建立了一种可特异、灵敏、快速鉴定大肠杆菌O_(8)、O_(9)、O_(149)与O_(157)血清型的多重PCR方法,为大肠杆菌O_(8)、O_(9)、O_(149)与O_(157)血清型检测和流行病学调查提供了新的技术手段。

摘要：参照GenBank中滑液支原体P53株序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增获得滑液支原体WVU1853菌株烯醇化酶基因并将其克隆至pGEM-T Easy,测序并完成点突变后构建重组表达质粒pET-28a-eno,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后纯化表达产物并测定其酶促活性。结果显示,表达产物具有水解酶活性,最适pH为7.5,最适温度为50℃,Mg2+可作为酶活性辅因子,相同浓度的Zn2+可提高酶活性,而Mn3+、Al 2+、Ni 2+、Ba2+和Li+对酶活性均有不同程度的抑制作用;其米氏常数(km)和最大反应速率(Vmax)分别为1.1×10-3 mol/L和0.739μmol/(***)。