摘要：目的对弓形虫表面抗原SAG4基因进行克隆、表达和免疫反应性分析。方法根据弓形虫RH株SAG4基因序列(GenBank登录号为AF340224.1)设计引物,体外扩增目的基因,并将其克隆至pMD19-T载体,经PCR和双酶切鉴定并测序,亚克隆至pET28a(+)质粒,转化大肠埃希菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析SAG4重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹(Westernblot-ting)分析该蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清的免疫反应性。结果扩增获得的目的基因片段为537bp。生物信息学分析表明重组基因编码产物为弓形虫SAG4抗原,是一种外膜蛋白。重组菌经IPTG诱导后,以包涵体的形式稳定表达SAG4。Westernblotting分析结果表明,诱导表达的蛋白能被弓形虫慢性感染小鼠血清识别,其相对分子质量(Mr)约为18740。结论重组蛋白SAG4有一定的免疫反应性。

摘要：目的分析广西4地带绦虫分离株COX1序列,了解亚洲绦虫在广西的分布。方法对鹿寨、融水、田东、三江等4县现症病人进行驱虫,收集绦虫成虫。绦虫成虫经反复洗涤后,各取孕节一节,研碎后提取基因组DNA;同时设计特异性引物,PCR扩增各分离株COX1片段,对扩增产物进行T A克隆测序;应用相关软件分析序列的同源性、遗传距离,同时构建系统发生树。同时,从GenBank检索亚洲绦虫、猪带绦虫和牛带绦虫COX1基因序列,并与4地分离株基因序列进行比较。结果广西4地5个带绦虫分离株的COX1碱基序列长度均为444 bp。鹿寨株与亚洲绦虫之间基因差异为5个位点(1.11%),同源性为98.87%,遗传距离为0.011,其在邻接法和简约法构建的系统发生树中位于同一分枝。融水A株与猪带绦虫同源性达100%,B株与牛带绦虫和亚洲绦虫的同源性分别达98.20%和96.17%;田东和三江分离株与猪带绦虫的同源性分别为99.55%和96.40%,遗传距离分别为0.005和0.037;鹿寨株与牛带绦虫的同源性达96.40%。结论广西鹿寨县存在亚洲绦虫流行,融水县存在牛带绦虫和猪带绦虫混合流行。