摘要：目的通过聚合酶链方法,以特异引物,从感染人乳头瘤病毒的新鲜食管癌组织获得人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L_2保守区线性抗原片段的基因,并体外表达。获得具有抗原活性的原核表达蛋白,以探索研制低廉,方便及准确的人乳头瘤病毒感染的新型诊断试剂。方法在前人研究的基础上,经计算机检索,选定与食管癌高度相关的人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L_2N端的一段基因,采用特异引物及聚合酶链方法从多例人乳头瘤病毒感染的食管癌组织DNA模板中,获得人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L_2保守区线性抗原片段的基因,经克隆入测序载体验征DNA大小及序列后,将HPV16 L_2 DNA保守区线性抗原基因片段克隆入高效原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,初步以Western-blot测定表达产物的抗原性:与乳头瘤病毒抗体及感染者血清的反应活性。结果以我们设计的特异引物,从两例人乳头瘤病毒感染阳性的食管癌组织DNA模板中能得到预期大小的PCR产物,并能插入预定的克隆载体中测序,所得基因的序列符合目的基因的序列,且两例组织所得的目的DNA序列完全一致,其插入大肠杆菌表达载体能获得表达,且表达产物具有抗原活性,能与商品化的乳头瘤病毒抗体及乳头瘤病毒感染患者的血清发生抗原抗体反应。结论从食管癌组织中能检出人乳头瘤病毒HPV16型晚期表达基因区L_2特定片段的基因,该片段确具高度保守性。在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物,有抗原活性,有望用于流行病学检查,预警人乳头瘤病毒感染相关的癌症发生。

摘要：目的　筛选数个在胃癌及癌前病变中检出率高的胃癌差异表达片段 .方法　以筛选出的 gcys- 10 ,gcys- 12 ,gcys-13,gcys- 16这 4个新基因片段为研究对象 ,将它们克隆入 T载体中进行测序 ,根据序列设计引物 ,采用 RT- PCR方法检测胃癌细胞株 GC790 1、胃粘膜细胞株 GES- 1以及胃癌、胃粘膜活检标本 .结果　 4个差异基因表达片段测序后经过同源性检索均为新基因 ,被基因库收录 .收录号为 AF0 5 4171,AF0 710 5 2 ,AF0 710 5 3,AF0 710 5 6 .根据这些基因设计的 4对引物均能从 GC790 1总 RNA中扩增出相应产物 ,而 gcys- 10的引物未能从 GES- 1细胞株中扩增出相应产物 . gcys- 10在5 0例活检标本中的检出率分别为 :萎缩性胃炎 83.3% ,肠腺化生 81.8% ,疣状胃炎 5 8.3% ,胃癌 88.9% ,胃溃疡 5 0 .0 % ,十二指肠溃疡 0 ,急性胃炎 0 .在 17例胃癌手术标本的检出率为 94.1% .结论　 gcys- 10 ,gcys- 12 ,gcys- 13,gcys- 16均为胃癌差异表达基因 ,其中 gcys- 10在胃癌及胃癌前病变中检出率非常高 。