摘要：为了检测实验动物常见的4种条件性致病菌:肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜肺巴斯德杆菌和绿脓杆菌,提出一种可更准确、灵敏、快速、简便的多重巢式PCR方法(MN-PCR)。根据待检微生物16S rDNA序列的保守区和可变区分别设计通用引物和特异引物,通过两种引物长短差异化创新设计,将模板富集和特异片段扩增两个过程整合为单个反应体系内的一步PCR反应。结果表明,MN-PCR方法能够在标准株DNA混合模板中同时扩增出4条待检测片段;而在阴性对照组中未检测出任何片段。MN-PCR方法在实际检测应用中能够成功检测出细菌感染阳性样本,且未扩增出其他微生物的特异性条带。建立的MN-PCR体系可以同时检测实验动物咽拭子等临床样本中的多种病原菌,与常规多重PCR方法相比,该方法具有特异性和灵敏度高、操作简便、节省时间等优点。

摘要：目的　构建大鼠寡霉素敏感相关蛋白 (OSCP)基因重组质粒。方法　从雌性SD大鼠脑组织中提取总RNA ,根据OSCP基因已知序列 ,设计合成 1对引物 ,用PCR方法扩增编码OSCP的基因片段 ,插入pGEM Teasy质粒 ,转化大肠杆菌JM1 0 9感受态细胞 ,经酶切鉴定 ,而后进行测序。结果　OSCP基因体外扩增产物大小为 70 0bp ,重组质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论　在国内初次克隆了大鼠OSCP基因 。