摘要：一般来说,数学解题的过程是一个逻辑推理的过程.但机械的推理未必总是有用.我们谈谈数学解题中可利用的一种有效的方法——构造法.所谓“构造”就是设计一个“模型”,使已知条件和结论之间的关系在“模型”上得以体现,然后借助于“模型”分析、解决问题.

摘要：根据GeneBank中已经发表的PRRSV毒株的ORF6基因高度保守序列，设计并合成了一对特异性引物，建立了用于检测PRRSV的RT—PCR诊断方法。从感染PRRSV—QD的Marc-145细胞中提取病毒RNA，然后经RT—PCR扩增，获得预期266bp的目的片断，而猪伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒（PCV）细胞培养物及Marc-145细胞进行同条件检测，结果为阴性；PRRSV扩增产物测序结果与GeneBank中已发表的PRRSV毒株序列同源性达94．4％～97．4％且应用本研究检测方法对已知基因型的10株PRRSV盲检，检出率100％。上述研究结果表明，所建立的RT—PCR诊断方法特异性好、敏感性高，可进一步应用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断。

摘要：为实时相对荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体LRP/LRmRNA表达水平,构建目的基因LRP/LR、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线;根据GeneBank中绵羊37 kD/67 kDLRP/LR（LRP/LR）和β-actin基因编码区保守序列,设计特异引物;提取肠道组织mRNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后,与pGEM-T-easy载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α;质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定后,获得阳性LRP/LR,β-actin重组质粒;将阳性重组质粒107～102梯度稀释作为模板,然后进行实时荧光定量PCR;系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示产物溶解曲线峰值单一,说明无引物二聚体及引物特异性高;LRP/LR和-βactin标准曲线相关系数分别为r2=0.999,r2=0.997,说明线性关系好;重复性试验结果显示所构建的重组质粒10次同条件扩增均Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5%,说明标准曲线重复性好,稳定性高。说明成功构建目的基因LRP/LR,内参基因β-actin标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体mRNA表达水平提供了基础。

摘要：本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing vector)定向连接,构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定,测序正确后,脂质体法转染C6细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平,以验证pG-super-shPrP的抑制效率;结果表明:重组质粒pG-super-shPrP构建成功,且显著降低C6细胞PrP mRNA表达(P<0.05),抑制效率为34.2%。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞,并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平,探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制,结果表明PrP促进细胞SOD的活性(P<0.01),但对细胞SOD的表达量无影响,即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上,利用此质粒,在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。

摘要：以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法。根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核衣壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因。将其克隆到PET-30a构成原核表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法。试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完全相符,且对其他常见的6种猪疫病阳性血清检测均为阴性,无交叉反应。本研究建立的rN-ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征常规诊断及流行病学的调查研究。

摘要：为了克隆传染性囊病病毒青岛分离株(IBDV-QD)的VP2基因及对其高变区序列进行分析,首先根据GenBank上已经发表的传染性囊病病毒(IBDV)UK661株的核苷酸序列,设计并合成了一对特异性的扩增IBDV-QDVP2基因的引物。以IBDV-QD株基因组为模版,利用RT-PCR技术扩增出长约1.5kb的基因片段,将其连接到pGEM-T-Easy载体上。经酶切分析、PCR鉴定及核苷酸序列测定,成功获得该分离株VP2基因的重组质粒。将IBDV-QD株VP2基因的高变区核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的14株IBDV相应序列应用软件进行同源性比较,并构建系统进化树。同源性比较和进化树分析表明,IBDV-QD与IBDV超强毒株(vvIBDV)关系最近,与标准强毒株、弱毒株、变异株相差较远;并且我国不同地区的vvIBDV存在差异,这为我国传染性囊病的流行病学调查奠定了基础。