摘要：基于人抗菌肽VIP(Vasoactive intestinal peptide)基因序列,按照毕赤酵母密码子偏好性设计引物;用SOE-PCR法扩增目的基因;然后将目的基因克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA上,构建VIP分泌表达菌株GS115-p PICZαA-vip。用甲醇诱导96 h收集上清,用质谱进行鉴定,结果显示分泌表达产物与人抗菌肽VIP理论值(3 326.82 Da)完全一致,表明人抗菌肽VIP成功得到分泌表达。琼脂糖凝胶扩散法实验结果显示,重组VIP对大肠杆菌Escherichia coli ATCC25922和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC25923都有很强的抗菌活性,MIC(Minimal inhibitory concentration)分别为8 mmol/L和16 mmol/L。进一步细胞毒性和溶血性实验结果显示,重组VIP对正常细胞NCM460和IPEC-J2没有毒性,其对SD大鼠红细胞不具有溶血活性。通过透射电镜观察了VIP的抗菌机制,结果显示VIP主要通过破坏细胞膜的方式抑杀细菌。本研究为人抗菌肽VIP的开发应用和大量生产奠定了基础。

摘要：根据GenBank上纤维素外切酶CbhA的基因序列,设计并克隆目的基因;将目的基因克隆至表达载体pET32a,构建重组质粒pET32a-CbhA;再将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,成功构建了重组工程菌BL21(DE3)-pET32a-CbhA,探讨了诱导温度、IPTG浓度和诱导时间对重组工程菌表达量的影响。结果表明,所构建的重组工程菌在诱导温度为33℃、IPTG浓度为0.7 mmol·L^(-1)、诱导时间为8h的条件下,表达量可达到46.37 mg·L^(-1),具有较高的纤维素降解活性。该研究为纤维素酶在大肠杆菌中后续共表达和酶的放大发酵技术的建立奠定了重要基础。