摘要：目的:构建并鉴定人canstatin基因腺病毒表达载体Ad-can及研究在卵巢癌的表达。方法:(1)提取人卵巢癌组织总RNA,设计带有特殊酶切位点的引物,用RT-PCR方法扩增canstatin片段,克隆入载体pMD-18T,并转化至大肠杆菌DH5α,大量扩增目的基因(pMD-can);(2)双酶切pMD-can和pAdtrack质粒,酶切产物在T4DNA连接酶作用下连接,获得pAdtrack-canstatin(pAdtr-can)穿梭载体;(3)PmeⅠ酶切pAdtr-can,使其线性化,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy共同转化大肠杆菌BJ5183,使其同源重组,获得pADeasy-canstatin(pAd-can)载体;(4)内切酶PacⅠ再次将重组子线性化,脂质体转染细胞株HEK293,借助GFP表达观察包装病毒Ad-can。重组腺病毒载体感染HEK293细胞扩增病毒,经4次扩增、纯化后,用空斑形成实验法测病毒滴度;(5)用包装的病毒转染卵巢癌细胞HO8910PM,借助GFP的荧光表达观察卵巢癌细胞转染情况;(6)RT-PCR检测转染后卵巢癌细胞中目的基因的表达。结果:各中间载体经酶切鉴定,DNA测序证实正确。转染的HEK293细胞2～3天产生病毒,7～10天出现病毒斑。最终包装的病毒中携带有目的基因canstatin,并能够在包装细胞中表达。用空斑形成实验法测定病毒滴度约为1.6×1011pfu/ml。将包装的病毒转染卵巢癌细胞,荧光显微镜下可观察到大部分卵巢癌细胞发出绿色荧光,经RT-PCR检测可发现canstatin基因扩增片段。结论:大肠杆菌内同源重组法能有效和较方便的构建canstatin基因腺病毒载体Ad-can。重组子Ad-can能转染卵巢癌细胞,并在卵巢癌细胞中表达,为进一步研究canstatin基因治疗卵巢肿瘤提供了良好的转导载体。

摘要：目的:应用FITC cRNA探针原位杂交技术检测卵巢上皮性癌组织中seprasemRNA的表达。方法:设计5′端含有T7RNA聚合酶启动子序列的PCR引物,以质粒PA15His的cDNA为模板扩增得到DNA片段,并在T7RNA聚合酶作用下,采用体外转录方法合成FITC标记的Seprase正义和反义RNA探针,对86例卵巢上皮性癌石蜡包埋组织进行原位杂交,检测seprasemRNA的原位表达,12例正常卵巢组织作对照。结果:86例卵巢癌组织se prasemRNA的表达阳性率为96.5%(83/86),显著高于在正常卵巢组织的16.16%(2/12)(P<0.01)。seprase mRNA的表达与卵巢癌组织学分级和临床分期有关,而与患者年龄、组织学类型无关。结论:在卵巢癌的发生发展中seprasemRNA起一定作用。

摘要：目的探讨上皮性卵巢癌组织中二肽基肽酶(DPP)mRNA的表达及临床意义。方法设计5′端含有T7RNA聚合酶启动子序列的PCR引物,以质粒pcD26His的cDNA为模板扩增得到DNA片段,并在T7RNA聚合酶作用下,采用体外转录方法合成FITC标记的DPP RNA探针,对86例卵巢上皮性癌石蜡包埋组织进行原位杂交,检测其DPP mRNA的表达,12例正常卵巢组织作对照。结果86例卵巢癌组织中的DPP mRNA0、1、2、3级表达者分别为2、18、40和26例,阳性表达率为97.67%(84/86),显著高于对照组的16.66%(2/12),P<0.01;其表达与卵巢癌组织学分级和临床分期有关。结论DPP mRNA在卵巢癌组织中的表达增高,在卵巢癌的发生发展中起一定作用。

摘要：妊娠高血压综合征孕妇血小板聚集的变化孙莹璞，乔玉环，王蕴慧，白勤（河南医科大学第一附属医院妇产科郑州４５００５２郑州邮电部设计院门诊部妇产科郑州４５０００７）关键词妊娠高血压综合征，全血，血小板凝集研究表明，血小板活性增加和继之释放的血管活性物质在许...

摘要：８１对异常孕产史夫妇的细胞遗传学分析河南医科大学一附属妇产科（４５００５２）孙莹璞，刘世广，乔玉环，陈爱军邮电部设计院门诊部妇科（４５０００７）白勤因细胞遗传学原因引起的自然流产、胎儿畸形、死胎、死产等，已得到临床医生的普遍重视。对因上述情况就诊于妇...

摘要：目的构建针对 Edg4基因的小分子干扰 RNA(siRNA)载体,初步观察其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的沉默效应。方法利用软件分析、设计针对人 Edg4 mRNA 的 siRNA 靶序列,合成发夹样 DNA 序列;退火成双链,克隆至真核表达载体 pRNAT-U6.1质粒上,经 PCR 技术鉴定及DNA 双向测序证实其序列无误后,用脂质体包裹并转染卵巢癌细胞系 SKOV3细胞,用荧光显微镜初步观察其在 SKOV3细胞中的转染率。采用实时荧光定量荧光定量 PCR 技术检测转染前后 SKOV3细胞中 Edg4 mRNA 的表达,生化法测定转染前后 SKOV3细胞上清液中溶血磷脂酸(LPA)含量的变化,流式细胞术检测转染后 SKOV3细胞的凋亡率。结果经 PCR 技术鉴定及 DNA 双向测序证实重组真核表达载体的序列无误,并将此命名为 pRNAT-U6.1-siEdg4。荧光显微镜下观察,转染后 SKOV3细胞内有明显绿色荧光信号,转染率为64%;实时荧光定量 PCR 技术检测显示,转染后 SKOV3细胞的Edg4 mRNA 表达水平(0.05±0.01)明显低于转染前(0.29±0.04,P<0.05);SKOV3细胞上清液中LPA 的含量,转染后明显低于转染前[分别为(3.0±1.0)、(7.5±2.2)μmol/L;P<0.05];流式细胞仪检测显示,转染后 SKOV3细胞的凋亡率明显高于转染前(分别为53.38%、0.51%;P<0.05)。结论本研究成功构建了针对人 Edg4基因的 siRNA 真核表达载体,并能较高效转染 SKOV3细胞,转染后能明显抑制 SKOV3细胞中 Edg4 mRNA 的表达,诱导卵巢癌细胞凋亡。

摘要：目的 探讨腕带标识在护理安全中的应用。方法 分析我院腕带的设计和使用以及查对流程,强调使用过程中的注意事项。结果 腕带标识简单、易行、效果可靠,有效的保证随时对病人进行快速准确的识别。结论 腕带标识使查对制度更加完善,护理管理更加规范,有效的提高了医疗护理质量,杜绝了差错事故的发生。