摘要：为阐明浙江省温州地区奶牛隐孢子虫感染情况及其种类分布,对地处温州市的乐清市、瑞安市和平阳县的3个奶牛场85份新鲜荷斯坦奶牛粪便样品进行DNA提取,并基于隐孢子虫小亚基核糖体核苷酸(SSU rRNA)基因位点设计特异扩增引物,进行隐孢子虫PCR扩增、测序和序列分析。结果显示,3个奶牛场奶牛隐孢子虫的总感染率为34.1%(29/85),其中,平阳县感染率最高,达42.6%(20/47);在不同年龄段奶牛中,断奶前犊牛感染率最高,达64.3%(18/28)。共检出4种隐孢子虫,分别为牛隐孢子虫(Cryptosporidium bovis)、瑞氏隐孢子虫(***)、安氏隐孢子虫(***)和奇异隐孢子虫(***),且在29份阳性样品中,***的占比最高(34.5%,10/29),分布范围最广,成为该地区奶牛感染隐孢子虫的优势虫种。结果提示,温洲地区奶牛隐孢子虫感染较为普遍,且种类较多。研究结果可为该地区奶牛隐孢子虫病的防控提供基础数据。

摘要：根据国外报道的序列设计1对引物,以纯化的柔嫩艾美耳球虫(***)杨凌(YL)株孢子化卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出*** YL株的TA4基因。序列分析表明,该序列全长741bp,开放阅读框(ORF)为651bp,共编码217个氨基酸,与*** HT株、*** BJ株和*** ZJ株的TA4基因ORF序列同源性分别为99.8%、99.8%和99.27%。由此确定所获得的目的基因为*** YL株TA4基因。利用生物信息学和分子生物学软件对TA4基因编码的蛋白进行结构预测,结果表明,该蛋白为一结构松散的球状蛋白。将TA4基因克隆到表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-TA4并在大肠杆菌BL21中进行表达,表达产物的SDS-PAGE分析结果表明,成功地表达了分子质量为41ku的融合蛋白。

摘要：根据GenBank发表的鸡柔嫩艾美耳球虫(Ei meriatenella)3-1E基因的ORF设计一对引物,用RT-PCR方法从***杨陵(YL)株总RNA中扩增3-1E基因,并将扩增产物与pMD18-T easy载体进行连接并测序,用DNAstar 5.0软件对测序结果进行分析。结果表明,2009年分离的***株3-1E基因与其他虫株相比,核苷酸有9个位点发生变化,其中7个位点的变化引起了相应氨基酸位点的改变,其他2个位点的变化未引起氨基酸的改变。对2006年和2009年分离的YL株3-1E基因的核苷酸进行了比对,结果发现,有两个核苷酸位点发生了变化。系统发育树分析表明,***株3-1E基因同种间与***甘肃株遗传关系最近,同属间与***法国株遗传关系最近。

摘要：旨在研究柔嫩艾美耳球虫(***)真核起始因子5(EteIF5)和5A(EteIF5A)的功能,克隆、表达并分析EteIF5和EteIF5A在***广东株不同发育阶段的表达量变化。根据***基因组数据预测的编码序列设计引物,采用RT-PCR方法克隆EteIF5和EteIF5A的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pMAL-c2x进行诱导表达。提取***5个发育阶段(/时期)的总RNA,使用qRT-PCR检测EteIF5和EteIF5A转录的动态变化。测序结果表明,克隆获得的EteIF5和EteIF5A ORF全长分别为1 248和486bp,各自编码315和161个氨基酸,均在大肠埃希菌表达系统中成功表达。qRT-PCR定量分析显示,eIF5和eIF5A的mRNA在***不同发育阶段转录量不同,子孢子阶段最高,在孢子化卵囊阶段最低。首次克隆获得了*** eIF5和eIF5A ORF,揭示EteIF5和EteIF5A mRNA的转录量在不同发育阶段有显著差异。试验结果为进一步研究EteIF5和EteIF5A的功能,从EteIF5A合成途径研制新型抗球虫药提供了试验基础。

摘要：为了解陕西省猪圆环病毒2型(PCV2)的遗传变异情况,根据GenBank登录的PCV2全基因组序列,设计1对引物,从陕西省部分地区规模化猪场疑似PCV2感染的病猪采集病料9份,应用PCR扩增PCV2的全基因,其中6份为阳性,并对扩增的6个PCV2全基因组序列进行测序和序列分析。基因测序表明,PCV2基因组全长为1 767bp;对6株病毒序列进行同源性比较,6个毒株全基因之间核苷酸同源性为98.3%~100%,与GenBank上已发表的国内外毒株全基因组比较,同源性为96.3%~97.8%;与近几年陕西株比较发现基因变异程度不稳定,与2013年分离株(KX352154.1)同源性最高,2015年分离株(KX352159.1)次之,反而与2014年分离株(KX068219.1)最低;对6个毒株的ORF1和ORF2基因进行同源性比较,6个毒株的ORF1和ORF2基因的核苷酸同源性分别为98.1%~100%和98.2%~100%,与GenBank上已发表的国内外参考株ORF1和ORF2基因进行同源性比较,同源性分别为97.6%~99.8%和91.5~96.0%。陕西省流行的PCV2基因组较为保守,变异不大,同源性很高。

摘要：旨在制备微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)线粒体蛋白(AOX)基因和微线体蛋白(TSP6)基因的DNA疫苗,评价其对贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)感染雏鸡的免疫保护性。根据GenBank库中AOX和TSP6基因的序列设计引物,扩增出编码2个保护性抗原基因的DNA片段,利用DNA重组技术将2个目的片段分别克隆到真核表达载体pVAX1,制成核酸疫苗pVAX1-AOX和pVAX1-TSP6。将制备的核酸疫苗肌肉注射免疫雏鸡,共分为4组,pVAX1组,pVAX1-AOX组,pVAX1-TSP6组,pVAX1-AOX+pVAX1-TSP6组,2周后检测雏鸡血清IgG抗体滴度和细胞因子(IL-4和IFN-γ)水平的变化。结果显示,免疫组中鸡的血清特异性IgG抗体水平、细胞因子IFN-γ都有明显的升高。攻卵囊试验结果表明,免疫组比对照组的排卵囊量明显减少,且排卵囊时间有所缩短。表明制备的pVAX1-AOX和pVAX1-TSP6核酸疫苗有较好的免疫保护作用。

摘要：根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化***5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2 N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32 a(+),构建了重组表达质粒pET-32 a(+)-SAG2,并将其转化至***21(DE3)。经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku。菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。

摘要：《动物寄生虫学》是一门实践性很强的专业课程,在其实习教学中引入项目教学法不仅有利于教学目标的实现,还可培养学生的创新能力和综合运用知识的能力。本文分析了项目教学法的特点,阐述了《动物寄生虫学》教学实习项目的设计,从项目的确定及下达、组织项目团队及制定项目计划、项目的组织实施、项目考核和评价等4个方面探讨了项目教学法在《动物寄生虫学》教学实习中的具体应用,对《动物寄生虫学》实习教学具有重要的促进意义。

摘要：以鸭疫里默氏杆菌血清1型(RA 1)基因组文库中筛选获得的一种"保守假定蛋白P25"基因的重组表达产物为包被抗原,建立了检测RA血清抗体的间接ELISA。诱导表达的重组P25蛋白纯化后进行包被,十字交叉滴定试验确定,此ELISA的最适抗原包被浓度为0.6μg/mL,血清最佳稀释度为1∶64,与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌感染鸭血清无交叉反应。以RA 1的P25为包被抗原对RA 2、5、8、10血清型的标准分型血清和经临床剖检诊断的病鸭血清进行检测,其结果均为阳性。以RA 1型的P25基因设计的特异性引物分别扩增出了RA 2、5、8、10的P25基因。所扩增的P25基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列和抗原表位在这些不同血清型间高度保守,提示此P25蛋白是各种血清型RA间的共同抗原,所建立的ELISA可以用于检测不同血清型RA的感染。