摘要：目的应用Taq Man-MGB探针实时PCR技术,建立1个Duffy血型基因分型的新方法,了解大连地区汉族人群Duffy血型等位基因频率分布特征。方法设计并合成Taq Man-MGB探针实时PCR的引物和探针,应用TaqMan-MGB探针实时PCR对120例健康献血者的Duffy血型进行基因分型,对其重复性和最低检出限进行评价。并将该法和传统的等位基因特异性引物PCR(PCR-ASP)方法进行比较。结果 Taq Man-MGB探针实时PCR方法和PCR-ASP法对Duffy血型的基因分型结果是完全一致的。Taq Man-MGB探针实时PCR再次分型结果和初次基因分型的结果是完全一致的。Taq Man-MGB探针实时PCR的最低检测限是100 pg。大连汉族人群Duffy血型FY*A基因频率为93.3%,FY*B的基因频率为6.7%,其基因分布特点和国内其他地区汉族人群相似,无显著性差异(P>0.05),但与浙江畲族相比,有显著性差异(P<0.05)。Fya和Fyb抗原不配合几率为0.116 7。结论应用Taq ManMGB探针实时PCR技术建立的Duffy血型基因分型方法具有快速、简单、准确、灵敏、重复性好、通量高等特点,优于传统的PCR-ASP法。

摘要：目的探讨熔解曲线分析法用于HPA-15基因分型,了解大连地区汉族人群HPA-15基因多态性。方法设计合成HPA-15等位基因特异性引物和1条公共引物,其中在2条等位基因特异性引物的5'末端分别加入具有不同长度并富含GC碱基的序列。使用这3条引物,进行实时PCR反应。在PCR反应后,进行熔解曲线分析,依据PCR产物熔解温度的差异,进行基因分型。应用熔解曲线分析法和常规PCR-SSP法对100名大连地区汉族人群的血液标本进行HPA-15基因分型。此外对熔解曲线分析法的重复性进行评价。结果 100个血液标本的熔解曲线分析法和常规PCR-SSP法的基因分型结果是完全一致的。10个血标本的2次熔解曲线分析结果是一致的。大连地区汉族人群HPA-15a、-15b基因频率分别为0.58和0.42。大连地区汉族人群与国内部分地区汉族人群相比,HPA-15等位基因频率的差异无统计学意义(P>0.05)。与新疆维吾尔族人群相比,HPA-15等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HPA的熔解曲线基因分型方法具有快速、简单、准确、通量高、重复性好等优点,要优于常规的PCR-SSP法。在国内HPA-15等位基因分布存在着种族差异。

摘要：背景:精神分裂症的发病与遗传关系密切,但对相关基因定位相当困难,因此有必要先寻找有关遗传标志。目的:通过对微卫星DNA vW A 多态性的分析,了解精神分裂症与vW A有关等位基因的关联情况。设计:以精神分裂症患者和随机人群为观察对象的病例-对照研究。单位:大连市第七人民医院病房和大连医科大学分子生物学实验室。对象:精神分裂症病例为2002-03/07大连市第七人民医院(精神病专科医院)住院患者32例,诊断符合《美国精神疾病诊断统计手册》第3版精神分裂症诊断标准,临床表现以阴性症状为主。随机人群样本为在大连市红十字血液中心随机选取的正常人血液样本123份,无精神疾病和严重躯体疾病,无明确亲缘关系。方法:采取抗凝全血标本,用PE Profilerplus 系统进行聚合酶链反应复合扩增,然后用ABI310型基因分析系统对扩增产物进行电泳和基因检测。计算出各等位基因的基因频率,并按H ardy-W einberg平衡定律计算出各等位基因的理论频率与实际观测值,作吻合度检验和连锁分析;将精神分裂症患者与随机人群进行比较,按RR =Pd ×(1-Pc)/Pc ×(1-Pd)公式进行相对危险度分析并作统计学显著性检验(RR:相对危险度;Pd:精神分裂症患者基因频率;Pc:随机人群基因频率),RR >1为有易感倾向,RR 0.05)。②精神分裂症患者vW A-14的检出率(17.2%)低于随机人群(33.3%),差异有显著性(RR=0.415,P=0.014);精神分裂症患者vW A-17的检出率(31.3%)高于随机人群(19.5%),差异有显著性(RR =1.866,P =0.043);其他各等位基因检出率差异无显著性(P >0.05)。结论:精神分裂症患者vW A-14的检出率显著低于随机人群,提示vW A-14在精神分裂症时可能会因某种原因而被负选择,其附近可能存在抵抗精神分裂症发病的基因。精神分裂症患者vW A-17的检出率显著高于随机人群,表明vW A-17与精神分裂症相关联,其附近可能存在精神分裂症易感基因。

摘要：目的建立用于RHD 1227G〉A基因分型的熔解曲线分析法。方法设计合成RHD 1227G〉A等位基因特异性引物和公共引物,并在2条等位基因特异性引物5＇端加上不同长度的GC序列。在实时PCR反应后,进行熔解曲线分析,依据PCR产物熔解温度的差异,对RHD 1227G〉A基因分型。将建立的熔解曲线分析法与常规的PCRSSP法比较。对于2种方法检测结果不符的标本,进行RHD基因第9外显子测序,确定该标本为RHD 1227G〉A基因型。结果应用熔解曲线分析法对84例标本进行基因分型,其中RHD 1227A＋/G-32例,1227A-/G＋22例,1227A＋/G＋6例,1227A-/G-24例。发现2例标本熔解曲线法检测的基因型为1227A＋/G-,而PCR-SSP法检测结果为1227A＋/G＋。经基因测序证实这2例标本结果是1227A＋/G-。结论用于RHD 1227G〉A基因分型的熔解曲线法具有操作简单、快速、准确等优点,优于常规的PCR-SSP法。

摘要：目的评价16S rRNA通用引物在快速检出血小板制品中污染细菌的实用性,寻找新的能够快速、准确地检出血小板中污染细菌的方法。方法用分子生物学方法提取样本中细菌DNA,用设计合成的16S rRNA和16S—23S rRNA基因区间引物进行扩增,产物经HaeⅢ酶切,酶切片段与血小板污染常见菌的酶切图谱对比,确定有无污染及污染菌种类。结果16S rRNA通用引物法可以在4h内完成全部检测,其中在保存24h的血小板标本中未检出污染菌,保存48h的血小板标本中有2份分别检出了金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,与全自动细菌培养仪的结果一致。结论16S rRNA通用引物是一种快速、准确检出血小板制品中污染细菌的方法,结果可靠,具有较高的临床应用价值。