摘要：采用人的全长酪氨酸羟化酶 c DNA为模板 ,设计特定的引物进行 PCR扩增反应 ,获得编码 N-端缺失 14 1个氨基酸的催化结构域 c DNA片段 ,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体 p GEX-4 T-1中 ,构建表达质粒 p GEXTHc,同时构建其全长片段的表达质粒 p GEXTHa。两者分别转化大肠杆菌 BL2 1,以 IPTG诱导可高效表达 ,产物以可溶形式存在 ,经亲和层析纯化后以蛋白酶裂解 ,再经亲和层析分离得到较纯的酶蛋白 ,采用高效液相色谱法 ( HPLC-ECD)检测酶活性 ,结果证明催化结构域活性高于全酶 ,是全酶活性的 2 .

摘要：背景:神经节苷脂是神经组织中含量丰富并可发挥神经保护作用的含唾液酸的鞘糖脂,在脑缺血或缺氧性疾患时有含量或组分的变化。目的:通过观察全脑缺血再灌注大鼠应用高压氧治疗后脑组织神经节苷脂的变化情况,探讨高压氧对缺血再灌注损伤治疗作用的可能途径。设计:随机-对照观察。单位:首都医科大学附属朝阳医院高压氧科和首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系。材料:动物模型制作于2002-03/04在首都医科大学附属朝阳医院高压氧科(北京市重点实验室)完成,各项指标检测在首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系完成。选择雌性SD大鼠54只,将大鼠随机分成9组,即假手术组、缺血再灌注6h,24h,48h,96h组及高压氧6h,24h,48h,96h组,每组6只。方法:除假手术组外,其余8组大鼠均建立脑缺血再灌注动物模型,按四动脉阻断法建立,缺血20min后再通。假手术组同样手术但不阻断动脉。将高压氧组大鼠置于实验舱内,纯氧洗舱5min,升压5min至0.1MPa后稳压,吸纯氧45min,减压10min。高压氧组大鼠在缺血再灌注3h后行高压氧处理1次,24h,48h及96h组在每天同一时间行高压氧处理1次。缺血再灌注组和假手术组处于常压空气环境中。再灌注组和高压氧处理组大鼠分别于再灌注6h,24h,48h及96h麻醉取全脑标本测定总神经节苷脂及各组分百分含量,神经节苷脂各组分以高效薄层层析法测定。主要观察指标:各组大鼠全脑组织神经节苷脂的总含量及其各组分的百分含量。结果:54只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①高压氧24h及48h组总神经节苷脂均显著高于假手术组及相应缺血再灌注时相组(F=12.730,122.246,P0.05)。②对缺血再灌注24h组大鼠GT1b相对含量显著低于假手术组(F=13.575,P<0.01),再灌注48h组GD1b及GM1分别低于假手术组(F=4.015,3.979,P<0.05),GM3于再灌注24h高于假手术组及其他时相组(F=21.450,P<0.01),并于再灌注96h反弹。③高压氧24h组GM1,GM3分别高于假手术组(F=3.970,21.450,P<0.05,<0.01),GD1a、GD1b和GT1b均低于假手术组(F=13.575,5.745,8.783,P<0.05～0.01),但GT1b明显高于缺血再灌注各相应时相组(F=8.783,P<0.05)。结论:大鼠短暂全脑缺血再灌注后可引起神经节苷脂总含量、GT1b,GD1b,GM1百分含量降低及GM3百分含量升高,其中提高脑组织神经节苷脂总量、GM1含量及加速GT1b的恢复可能为高压氧治疗改善缺血性脑损伤的作用途径,而GD1a,GD1b百分含量的下降有何作用尚不清楚。

摘要：从人胎肝组织中提取总mRNA ,设计 2对特异引物 ,通过RT PCR获得了人源内抑素基因 ,将其分别插入克隆载体 pBluescript和表达载体pGEX 4T 1中以构建重组质粒。

摘要：本文介绍了首都医科大学生物化学系在全面推进素质教育过程中以现代教育思想为指导,重组生物化学理论教学与实验教学;以兴趣为主导,运用科研、教学两种途径开展生物化学实验第二课堂活动,为提高医学生的动手能力,培养医学生的科研思维和初步课题设计能力以及提高他们的自身素质进行了有益的尝试。

摘要：设计合成含适当酶切位点的PCR引物 ,以人的全长THcDNA为模板 ,进行PCR扩增反应 ,得到人酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase,TH)全长及催化核心序列 ,将其分别插入谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 4T 1 ,转化入大肠杆菌BL2 1 ,以IPTG诱导表达 ,SDS PAGE、westernblotting分析表达产物。结果获得了编码N 端缺失 1 4 5个氨基酸的酪氨酸羟化酶催化结构域的cDNA片段及带一定内切酶识别位点的全长片段 ,表达载体构建正确。插入片段序列与人THmRNA相应序列完全一致。转入重组质粒的菌经诱导后 ,有相对分子质量约为 8.3万及 6.6万的外源融合蛋白表达 。

摘要：生物化学实验课较理论课具有独立性,总结了在相关理论教学,开设综合性、设计性实验,培养科研思维,加强与临床的联系等方面的改革。

摘要：通过优化重组、交叉融合,将生物化学、细胞生物学、遗传学和分子生物学实验课程合并为一门独立的课程——医学生物学实验课程。遵从医学生物学实验的规律和特点,将课程内容划分为五个板块（基本理论与技能训练,细胞和亚细胞组分分析,生物分子分析,分子生物学实验和实验技术在医学研究中的应用）。在课程中,既设置了能够体现各学科自身特点的验证性实验,又设置了能够体现跨学科、交叉渗透和观念创新、实验技术创新的综合性、设计性实验。本研究的目的是通过对实验课程的改革使学生掌握医学生物学实验的基本理论和基本技能,培养学生科学的思维、综合分析、解决问题的能力,提高学生的实践动手能力、思考和认识医学问题的能力。