摘要：背景:研究证明细胞的密度、细胞之间的相互作用、培养的体系、细胞因子等对骨髓基质干细胞的分化产生影响。目的:实验拟验证微球培养的人骨髓基质干细胞在特定诱导条件下向软骨细胞的分化情况。设计、时间及地点:以细胞为对象的观察实验,于2006-02/2007-10在青岛市城阳人民医院干细胞实验室完成。材料:骨髓标本取自股骨颈骨折或者髋关节炎症实施髋关节置换手术患者。方法:抽取人骨髓组织,采用密度梯度法分离培养骨髓基质干细胞。当培养的骨髓基质干细胞达到7×106个细胞时,将每500000个细胞离心制成高密度细胞微球,在含有DMEM高糖、胰岛素、转铁蛋白、选择素、丙酮酸、脯氨酸、BSA、地塞米松、抗坏血酸的促软骨细胞分化培养液培养6周。主要观察指标:分析细胞外基质中蛋白聚糖含量,并通过组织化学和免疫组织化学方法,以阿尔新蓝染色细胞外基质中的蛋白聚糖,以胶原蛋白II染色显现细胞外基质中的胶原蛋白II,对成软骨方向分化的质量进行评价。结果:在微球培养的第3周就可以检测到细胞外基质中的蛋白聚糖,并且随着时间的增长其单位细胞的蛋白聚糖分泌量不断增加。通过阿尔新蓝和胶原蛋白II染色,镜下观察在培养的第4周,细胞微球就可以形成细胞外特异性的软骨基质、蛋白多糖和II型胶原;6周时,细胞外基质中蛋白聚糖和胶原蛋白II形成更加明显。结论:在无血清软骨细胞分化培养液中,采用高密度微球培养方法可定向诱导骨髓基质干细胞分化为软骨细胞。