摘要：为获得中华补血草ISSR的最佳反应体系,采用正交试验设计,对影响ISSR反应的模板含量、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度、扩增程序及退火温度等多种因子进行优化筛选.通过各因子的组合研究,分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立了可用于中华补血ISSR-PCR分析的稳定可靠的反应体系:25μLPCR反应体积,10×Buffer 2.5μL,2 mmol/L MgCl2,dNTP 100μmol/L,模板DNA为20 ng,Taq聚合酶1.5 U,随机引物0.4μmol/L,退火温度52℃～58℃.所建立的中华补血草ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可以较好地应用于中华补血草的遗传多样性及物种保护的研究.