摘要：目的 观察骨桥蛋白（OPN）在低钙和氟中毒大鼠肾组织中的表达,探讨OPN与氟中毒肾损害的关系.方法 1月龄Wistar大鼠48只,雌雄各半,体质量80～100 g.按2×2析因设计将大鼠按质量随机分为4组：对照组、高氟组、低钙组、低钙高氟组,每组12只,雌雄各半.采用合成饲料喂养,高氟组和低钙高氟组饲料中的玉米来自燃煤污染型氟中毒病区,含氟量为100 mg/kg,对照组和低钙组饲料中的玉米来自于非病区,含氟量为5 mg/kg.喂养16周后处死大鼠,观察各组大鼠牙齿变化,计算大鼠氟斑牙检出率.取大鼠肾脏,采用RT-PCR技术及免疫组化技术检测大鼠肾脏OPN蛋白和OPN mRNA表达.结果 对照组和低钙组牙齿生长良好,高氟组、低钙高氟组大鼠均出现明显的氟斑牙,氟斑牙检出率为100%.免疫组化结果表明,OPN主要定位于肾组织的肾小管上皮细胞中.对照组和低钙组肾组织OPN阳性细胞淡染、散在分布,高氟组与低钙高氟组OPN阳性细胞着色较深,广泛分布在肾小管上皮细胞中.OPN蛋白表达显示,高氟组（168.64±13.21）和低钙高氟组（169.26±8.92）高于对照组（145.78±10.26,P均〈0.01）和低钙组（149.60±16.84,P均〈0.01） OPN mRNA表达显示,高氟组（1.89±0.37）和低钙高氟组（1.94±0.22）高于对照组（1.32±0.26,P均〈0.05）和低钙组（1.30±0.18,P均〈0.05）.高氟影响OPN蛋白和OPN mRNA表达（F=13.821、4.24,P均〈0.05）,低钙不影响OPN蛋白和OPN mRNA表达（F=2.164、0.58,P均〉0.05）,但高氟和低钙联合作用时,二者对OPN蛋白和OPN mRNA表达有交互作用（F=6.257、4.32,P均〈0.05）.结论 过量氟可促使大鼠肾组织的OPN表达增加,提示OPN与氟中毒肾损害程度密切相关,可考虑作为一种氟中毒肾损害的标志,并且,高氟与低钙同时存在时,大鼠肾损害会进一步加重,提示低钙是氟化物损害肾脏的重要环节.

摘要：目的探讨慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞胞体和突触内线粒体分布情况及线粒体分裂基因Fisl表达的改变。方法sD大鼠60只，雌雄各半，体质量100～120g，按完全随机设计法分为3组，每组20只。在饮水中加入不同剂量的氟（0、10和50mg／L）来饲养，实验期6个月。采用荧光素标记细胞色素C氧化酶Ⅳ亚型1抗体显示线粒体，观察线粒体在神经细胞胞体和突触内分布；用即时荧光定量PCR、Westernblot和免疫组织化学sP方法检测线粒体分裂基因Fisl表达。结果染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙，尿氟含量明显升高，表明成功地复制了慢性氟中毒大鼠模型。饲以10mg／L和50mg／L的染氟大鼠胞体内聚集型的神经细胞数[（34．8±4．7）和（39．3±3．0）]较对照组（4．4±2．3）显著增加（P〈0．05）；分裂基因FislmRNA转录水平[（3773±1292）和（1274±162）]较对照组（277±73）显著升高（P〈0．05）；Fisl蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞数[（54．0±3．6）和（51．3±4．1）]和Westernblot法蛋白印迹平均吸光度值[（2．9±0．4）和（2．6±0．6）]水平较对照组[（25．2±2．5）和（1．8±0．2）]明显升高（P〈0．05）。结论摄人过量的氟可导致大鼠大脑皮质神经细胞线粒体在胞体和突触内重分布，诱导线粒体Fisl基因表达，促进线粒体分裂。神经细胞线粒体重分布可能与神经细胞Fisl高表达导致线粒体功能障碍有关。

摘要：目的评估线粒体分裂蛋白1(Fis1)在甲基苯丙胺(METH)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)损伤中的作用。方法采用成组设计方法,将体外培养SH-SY5Y细胞分为不同组别:未沉默组、沉默阴性组和沉默组,不同浓度的METH诱导各组SH-SY5Y细胞24 h。利用Western blot检测Fis1蛋白表达水平,使用CCK-8细胞毒性增殖实验分析METH对SH-SY5Y细胞增殖能力的影响,利用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测METH对SH-SY5Y细胞MMP水平的影响,使用透射电镜观察METH对SH-SY5Y细胞线粒体超微结构的影响。结果未沉默组、沉默阴性组和沉默组中,与对照组比较,各组组内随METH诱导SH-SY5Y细胞的浓度升高,Fis1蛋白表达水平升高(P<0.05)、增殖能力减弱(P<0.05)、MMP水平降低(P<0.05);与未沉默组和沉默阴性组相同浓度比较,沉默组SH-SY5Y细胞Fis1蛋白表达水平降低(P<0.05),增殖能力增强(P<0.05),MMP水平升高(P<0.05)。组内与对照组比较,2.0mmol·L^-1 METH诱导未沉默组、沉默阴性组和沉默组,透射电镜观察见线粒体小球状结构增多(P<0.01)。结论Fis1可能在METH诱导体外培养SH-SY5Y细胞损伤中起关键作用。

摘要：目的观察慢性氟中毒大鼠肝脏微管相关蛋白1轻链3(LC3)B、P62、Beclin1的蛋白和mRNA表达,探讨自噬在氟中毒肝损伤发病机制中的作用。方法采用成组设计,54只SD大鼠,按照体重(100~120 g)采用随机数字表法分为9组,每组6只,雌雄各半,分别为对照组(NC组)、低氟组(LF组)、高氟组(HF组)、NC+雷帕霉素(RAP)组、LF+RAP组、HF+RAP组、NC+氯喹(CQ)组、LF+CQ组、HF+CQ组。NC组饮用自来水(氟离子浓度<0.5 mg/L),LF和HF组分别饮用氟离子浓度为5.0、50.0 mg/L含氟水;NC+RAP、LF+RAP、HF+RAP组分别以相应的饮水饲养3个月后经腹腔每天注射1.5 mg/kg RAP,共10 d;NC+CQ、LF+CQ、HF+CQ组分别以相应的饮水饲养3个月后经腹腔每天注射60 mg/kg CQ,共10 d。采集各组大鼠四肢骨、24 h尿液,检测骨氟、尿氟含量;苏木素-伊红染色法观察肝组织形态学变化;免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法检测肝脏LC3B、P62、Beclin1蛋白和mRNA表达情况。结果染氟后,与NC组比较[(0.03±0.00)mg/kg、(0.34±0.08)mg/L],HF组骨氟[(3.86±0.08)mg/kg]、尿氟含量[(1.11±0.16)mg/L]均较高(P均<0.05)。光镜下,NC组大鼠肝组织小叶结构清晰,肝索排列整齐,细胞结构正常,LF、HF组出现不同程度的肝细胞水肿;给予RAP后,与相应染氟组比较,肝细胞形态未见明显变化;给予CQ后,与相应染氟组比较,可见肝细胞明显水肿,随染氟浓度增加水肿程度加重。与NC组比较,HF组LC3B、Beclin1蛋白表达量较高(P均<0.05),P62蛋白表达量较低(P<0.05)。腹腔注射RAP后,与LF组比较,LF+RAP组LC3B、P62蛋白表达量较低(P均<0.05);与HF组比较,HF+RAP组LC3B、Beclin1蛋白表达量较低(P均<0.05)。腹腔注射CQ后,与LF组比较,LF+CQ组P62蛋白表达量较高(P<0.05);与HF组比较,HF+CQ组P62蛋白表达量较高(P<0.05)。结论早期(3个月)氟摄入可促进大鼠肝细胞自噬,引起肝细胞水肿,RAP有类似作用;CQ可能通过抑制肝细胞自噬而诱导肝脏损伤。

摘要：目的 研究沉默线粒体分裂蛋白1（Fis1）对人脑神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y细胞）Fis1、线粒体融合蛋白1（Mfn1）及线粒体膜电位水平的影响，并进一步探讨线粒体融合分裂在慢性氟中毒发病机制中的作用。方法 体外培养SH-SY5Y细胞，待细胞贴壁生长进入对数增长期时进行实验，采用成组设计将细胞分为未染氟空白对照组、染氟组［2 mmol／L氟化钠（NaF）］、染氟阴性对照组［2 mmol／L NaF ＋ 非特异性小干扰RNA（siRNA）］、沉默组（2 mmol／L NaF ＋ siRNA-Fis1）。蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中Fis1和Mfn1蛋白表达水平；实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测Fis1和Mfn1 mRNA表达水平；线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位水平。结果 与空白对照组（1.37 ± 0.18、1.00 ± 0.04，1.57 ± 0.19、1.00 ± 0.04，1.00 ± 0.10）比较，染氟组Fis1蛋白（1.72 ± 0.04）及mRNA表达水平（1.48 ± 0.13）均升高，Mfn1蛋白（0.87 ± 0.02）及mRNA表达水平（0.69 ± 0.07）均降低，线粒体膜电位水平（0.76 ± 0.13）降低（P均 〈 0.05）。与空白对照组比较，沉默组Fis1蛋白（0.79 ± 0.07）及mRNA表达水平（0.06 ± 0.03）均降低，Mfn1蛋白（1.71 ± 0.04）及mRNA表达水平（1.52 ± 0.05）均升高（P均 〈 0.05），线粒体膜电位水平（0.94 ± 0.01）有降低趋势。与染氟组比较，沉默组Fis1蛋白及mRNA表达水平均降低，Mfn1蛋白及mRNA表达水平均升高，线粒体膜电位水平升高（P均 〈 0.05）。结论 人工抑制Fis1基因表达水平可降低氟致SH-SY5Y细胞的线粒体分裂和线粒体膜电位损伤。

摘要：在歌曲创作和歌唱艺术发展的过程中,乐器伴奏始终是焕发歌曲异彩不可或缺的手段之一。歌曲创作的数量和技法将得到空前的发展,为了更加完美的表达歌曲的艺术内涵,编配伴奏的研究与实践就显得尤为重要。乐器伴奏对歌曲表现力的发挥起着举足轻重的作用。

摘要：随着现如今教育事业的不断发展,SPOC作为新型教学模式出现在教育事业当中,它作为线教学以及传统教学模式相结合的形式,在一定层次上促使教师有很大的提升空间。本文主要针对在SPOC模式下的教学改革进行深入的研究,促进我国教育事业的发展。