摘要：为研究酮康唑治疗畜禽真菌感染过程中能否给与维生素C辅助治疗,体外测试了添加维生素C后白念珠菌对酮康唑的敏感性。结果发现,维生素C能显著抑制酮康唑对白色念珠菌的敏感性,为科学治疗畜禽机会性真菌临床感染提供了依据。

摘要：本研究参考公开发表的Alfort株基因组全序列 ,用计算机软件Dnastar的PrimerSelect程序设计了两对SCFVE2基因高变区的特异性引物 ,对黑龙江东部地区分离的 5株猪瘟野毒 (HL、JN、MSND、MSPD和MSHT株 )进行RT_PCR扩增、克隆和序列测定 ,并将这 5株野毒的高变区基因序列与国内外公开发表的参考毒株的相应部分进行了比较。结果表明 ,5株分离毒均为基因II群 ,且形成两个独立的分支 ,HL、JN株与HCLV株氨基酸差异在 60 %以上 ,而MS株与HCLV株氨基酸差异在 3 0 %左右。

摘要：为了探究转化生长因子-β激活蛋白1(TAK1)在牛疱疹病毒1型(BHV-1)感染中的作用,构建牛源TAK1基因慢病毒载体,筛选TAK1基因稳转过表达细胞株。根据GenBank中牛源TAK1基因序列(登录号:NM-001081595.1)设计引物,PCR扩增目的片段后插入载体中,构建pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒,将其导入293T细胞进行慢病毒包装及滴度测定。用包装好的慢病毒感染牛肾上皮细胞(MDBK),筛选过表达TAK1基因的稳转细胞株,通过荧光显微镜和免疫印迹试验(Western blot)进一步验证该基因的过表达。重组质粒双酶切与测序结果表明成功建立了pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒。慢病毒滴度测定结果显示,过表达TAK1基因组病毒滴度为1.0×108 TU/mL,空载体对照组病毒滴度为5.0×108 TU/mL。重组慢病毒以MOI 180转染MDBK细胞,荧光显微镜观察到明显的红色荧光,表明慢病毒质粒转染成功。Western blot结果显示,在相应分子量处检测到目的条带,进一步表明TAK1基因被表达。成功构建了pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒,并筛选出了过表达TAK1基因的MDBK稳转细胞株,为深入研究TAK1在BHV-1感染中机制的研究奠定基础。

摘要：采用平板稀释法进行菌种选育,筛选玉米茎腐病的生防菌及对该菌株进行液体发酵。应用响应面法优化发酵条件,以禾谷镰刀菌为指示菌测定生物活性。筛选得到1株较高活性菌株(YH-1),将该菌株进行发酵条件优化,抑菌圈直径由原来的20.60 mm增至25.80 mm。YH-1作为高效玉米茎腐病拮抗菌株,可为生防菌剂开发奠定良好基础。

摘要：猪瘟、猪细小病毒感染和猪伪狂犬病是3种最为常见的、引起猪繁殖障碍的传染性疾病,在世界范围内广泛流行,给养猪业带来严重的经济损失[1～3].在兽医临床上这3种疾病有时呈混合感染,且临床表现相似,给临床诊断造成很大困难.目前对这3种疾病的确诊方法都存在着繁琐、耗时、特异性差等缺点,因而有必要建立一种特异、快速、灵敏的诊断方法用于这些疾病的临床诊断和检测.Liu [4]、李文刚[5]及吴斌[6]等分别研究了这3种病的RT-PCR或PCR诊断方法,但PCR扩增条件均缺乏系统性研究.本实验设计了检测猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的PCR引物,建立了这3种疾病病原的PCR检测方法,并对临床送检样本进行了检测,为进一步应用该方法诊断这些疾病提供一定的参考.

摘要：金黄色葡萄球菌是一种重要的人畜致病菌,IsdD属于金黄色葡萄球菌Isd系统中的重要成员。本研究根据Gen-Bank报道的金黄色葡萄球菌IsdD基因序列设计一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板扩增出目的片段Is-dD,将其用NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到载体pET32a(+)上,构建重组质粒pET32a(+-)IsdD。序列分析结果显示,目的基因序列与网上的IsdD序列相比核苷酸序列和氨基酸序列同源性均在98%以上。将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌*** BL21中并成功诱导表达出大小为61.3ku的蛋白,这为下一步研究IsdD蛋白的结构和功能奠定了良好基础。

摘要：目的应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌Gap C1-150 aa(Gap C1)的大肠埃希菌,为进一步构建大肠埃希菌表面展示重组菌株奠定基础。方法根据Gen Bank中登录的gap C基因序列(GI:30348860)设计引物,以质粒p KD3、p QE30/lpp-omp A-gap C为模板进行PCR扩增、融合,获得融合片段,转化入含p KD46质粒的大肠埃希菌HB101中,利用p KD46编码的RED系统将融合片段重组入基因组中,经氨苄西林(Amp)和氯霉素(Cm)抗性筛选,获得去除p KD46质粒的重组菌(HB101LOG)。对重组菌株进行PCR、Western blot、流式细胞术、荧光显微镜及生物学特性检测。结果 PCR结果显示,重组菌株构建正确;重组大肠埃希菌HB101LOG在菌体表面表达了外源蛋白Gap C1-150 aa;激光共聚焦显微镜观察到HB101LOG可见明显的绿色荧光,HB101未见绿色荧光;重组菌株HB101LOG和HB101的生长曲线符合大肠埃希菌的生长规律。结论应用RED系统成功构建了能展示链球菌Gap C1-150 aa的大肠埃希菌重组菌株。

摘要：本文研究了新鲜大蒜液在乳品控制管理中的抑菌效果,结果发现,添加10%的新鲜大蒜法能够很好的抑制生鲜乳中大肠杆菌的增殖。

摘要：金黄色葡萄球菌(***)表达的菌体表面纤连蛋白结合蛋白A(FnbpA)在感染早期与宿主细胞粘附过程中起关键作用,将其免疫小鼠后能够诱导机体产生强烈的Th1和Th17反应。但FnbpA诱导Th1和Th17反应的CD4^+ T细胞表位尚不清楚。本研究根据FnbpA二级结构及其与MHCⅡ分子的结合能力对CD4^+ T细胞表位进行预测与分析,选择并合成7个候选CD4^+ T细胞表位肽。将每个表位肽分别对FnbpA免疫的C57BL/6小鼠CD4^+ T细胞进行体外刺激,通过检测CD4^+ T细胞增殖及其分泌的细胞因子水平对免疫优势表位进行初步鉴定。再以初步鉴定的优势表位肽段免疫小鼠,并检测其诱导的特异性细胞免疫应答水平。结果表明,表位肽F5(FnbpA488-505)能够显著诱导CD4^+ T细胞增殖并分泌高水平IFN-γ和IL-17A,而且F5在不同***菌株中高度保守。表明FnbpA_(488-505)是诱导CD4^+ T细胞分化为Th1/Th17的T细胞表位。本研究为***的FnbpA表位肽疫苗的进一步设计提供了实验依据。

摘要：金黄色葡萄球菌是一种人畜重要的致病微生物,寻找新型药物靶标是及时有效治疗金黄色葡萄球菌感染的潜在途径。本实验依据数据库,体外设计并合成了一对特异引物,应用PCR方法扩增出一种新的磷酸酶基因,并将该基因克隆至表达载体p ET2a上。经测序、酶切和PCR鉴定正确后转化大肠杆菌感受态细胞BL21中,经IPTG体外诱导表达出重组蛋白并对其进行了磷酸酶活性测定。结果表明:该基因编码蛋白具有更多依赖于镁离子的磷酸酶活性,这种酶活性受到特异性抑制剂氟化钠的抑制。研究结果为进一步挖掘该蛋白作为金黄色葡萄球菌感染有效治疗药物靶点提供了数据资料。