摘要：【目的】研制禽致病性大肠杆菌菌影负载鸭源鸡杆菌flfA基因的核酸疫苗,并评估其在鸡体内的免疫保护效果。【方法】以鸭源鸡杆菌的菌毛基因flfA为目的基因,采用携带鸡β肌动蛋白启动子的pCAGGS-HA质粒作为表达载体,构建pCAGGS-flfA真核表达质粒;构建温控质粒PBV-E-SN,并将其转化至对氨苄青霉素敏感的禽致病性大肠杆菌分离株制备菌影;将pCAGGSflfA质粒装载入菌影制备菌影疫苗,设计菌影负载pCAGGS-flfA质粒组、pCAGGS-flfA质粒组、空菌影组、PBS组及正常对照组。对7日龄雏鸡进行首次免疫,首免2周后二次加强免疫,首免4周后对鸡进行鸭源鸡杆菌攻毒试验,检测疫苗的免疫保护效果。【结果】所构建的真核表达质粒pCAGGS-flfA能在体外细胞中成功表达;构建的禽致病性大肠杆菌菌影菌株在42℃热诱导210min后,裂解率达到99.94%;免疫保护试验结果显示,无论是通过ELISA检测的特异性IgG抗体水平,还是对鸡泄殖腔拭子和咽拭子的排菌情况以及组织脏器中细菌载量的测定,菌影负载pCAGGS-flfA质粒组的免疫保护效果均显著高于其他免疫组,包括单独免疫pCAGGS-flfA质粒组。与单独免疫pCAGGS-flfA质粒组相比,菌影负载pCAGGS-flfA质粒组的免疫保护效果更为优越。【结论】本研究表明菌影作为pCAGGS-flfA的负载载体显著增强了该核酸疫苗的免疫保护效果。