摘要：为分析吉林省流行的猪附红细胞体基因序列,根据发表的猪附红细胞体16S rRNA基因序列设计引物,扩增出长度约为541 bp的基因片段,并成功地将该基因克隆到pGEM-T Easy载体。将经NotⅠ酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,与发表的附红细胞体基因序列进行比较,试验所获得的核苷酸序列与猪附红细胞体16S rRNA基因序列非常相近,同源性为97.8%-100%,从而证明吉林省所流行的猪附红细胞体属于16S rRNA基因群。

摘要：根据驽巴贝斯虫BC-48基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立了驽巴贝斯虫PCR检测方法。试验扩增出610 bp的基因片段,其序列与GenBank上驽巴贝斯虫BC-48基因同源性为96.7%。而对新孢子虫、弓形虫、马巴贝斯虫的基因组DNA没有扩增带出现。对驽巴贝斯虫基因组DNA的最小检测量为2.812 fg/μL。通过对35份临床样品的检测,阳性率为20%。同时与血液涂片染色镜检进行了比较,结果表明,PCR检测方法准确、敏感、特异。

摘要：为建立一种能定性与定量检测猪附红细胞体的方法,根据GenBank中猪附红细胞体的16SrRNA基因高度保守区设计了特异性引物和探针,经各反应条件的优化,建立了一种快速检测猪附红细胞体核酸载量的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,该检测方法在107～101 copies/μL具有良好的线性关系(RSq=0.999)。能检测到模板的下限为30copies,灵敏度是普通PCR检测方法的100倍。该检测方法与其他猪常见病病原体无交叉反应,具有良好的重复性。对临诊疑似猪附红细胞体感染猪血液进行了检测,其检出率比常规PCR方法高10%。表明该方法可用于临床上猪附红细胞体的检测及定量分析。

摘要：研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白的基因序列设计合成1对引物,用PCR方法扩增出了牛瑟氏泰勒虫的基因片段,将该基因纯化后连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析,并用此方法对延边某奶牛场10头奶牛进行了检测。结果表明:10份样品中9份为阳性,所扩增的目的基因核苷酸长为868bp,共编码283个氨基酸;该段基因片段与牛泰勒虫韩国株核苷酸序列同源性为99·4%,氨基酸同源性为99·3%。

摘要：本研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,对寄生于牛体内的瑟氏泰勒虫基因组DNA进行扩增,得到1 356 bp的18S rRNA基因片段,测序后blast分析表明该虫种属牛瑟氏泰勒虫。将该基因片段序列与GenBank中8种已知泰勒虫的相应序列进行比较分析,建立系统发育树。结果表明,牛瑟氏泰勒虫吉林分离株与水牛泰勒虫亲缘关系最近,与小泰勒虫亲缘关系较远。这一结果说明宿主因素对泰勒虫的基因型影响较大。

摘要：为建立快速、灵敏、特异、低成本的瑟氏泰勒虫检测方法,根据GenBank上发表的瑟氏泰勒虫p33基因序列设计合成1对引物,通过PCR退火温度的筛选、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立瑟氏泰勒虫血液直接PCR检测方法。该方法能扩增瑟氏泰勒虫p33基因的1段416 bp序列,而与弓形虫、新孢子虫、牛附红细胞体基因序列均无交叉反应。该方法检测出的1μL血液最大稀释倍数为40。应用血液直接PCR方法和常规PCR对吉林省8个地区某牛场采取的210份样本进行检测的结果表明:直接PCR阳性率为30.0%,而常规PCR阳性率为25.7%,差异不显著(P>0.05);两者的总符合率为94%,阳性符合率为80%,阴性符合率为92%;2种方法之间的Kappa值为0.85,说明该法更具有推广和应用价值。该试验成功应用了血液直接PCR检测方法,为瑟氏泰勒虫病的快速诊断和流行病学调查提供了一种新的方法。

摘要：为建立东方泰勒虫PCR-ELISA检测方法,根据GenBank中报道的东方泰勒虫p33基因设计1对分别标记生物素(Biot)和地高辛(Dig)的引物,并优化PCR扩增和ELISA检测步骤,建立了东方泰勒虫PCRELISA。结果表明:该方法能检出的东方泰勒虫基因组DNA为18pg/μL,敏感性比常规PCR高10倍;且与环形泰勒虫、新孢子虫和弓形虫等的基因组DNA无交叉反应。对112份待检样本检测的结果,阳性检出率为34.8%(39/112),高于常规PCR的28.6%(32/112)。因此,所建立的东方泰勒虫PCR-ELISA具有敏感、特异、安全和快速的优点,适用于东方泰勒虫病的分子流行病学调查和口岸检疫等批量样本的检测。

摘要：为分析马巴贝斯虫吉林省分离株的18S rRNA基因序列,根据马巴贝斯虫18S rRNA基因序列设计1对引物,对吉林省的马匹血液基因组DNA进行PCR扩增,PCR产物进行克隆、测序,扩增出大小为435 bp的马巴贝斯虫18S rRNA基因片段.序列分析显示,马巴贝斯虫吉林省分离株与南非株同源性最高,为98.4%.

摘要：为了建立一种能定量检测鹅细小病毒（GPV）的荧光定量PCR方法，根据GenBank已收录GPVVP3基因保守区设计1对特异引物和TaqMan探针，经反应条件优化、标准曲线建立，以及敏感性、特异性和重复性试验。结果显示，该方法在10^7～10^2拷贝/μL具有良好的线性关系（R^2=0．999）；灵敏度是普通PCR方法的100倍；对其他3种常见禽病毒无特异性扩增，具有较好的特异性；组内与组间的变异系数均小于2％，具有良好的重复性。对临床20份疑似GPV感染鹅病料进行检测，检出率比普通PCR高10％。表明本试验建立的TaqMan荧光定量PCR方法准确、稳定、灵敏和特异，可以用于GPV临床定性与定量检测。