摘要：目的原核表达并初步纯化牛乳溶菌酶(Bos taurus lysozyme1,LYZ1)。方法人工设计并合成LYZ1基因CDS序列,将其克隆至表达载体pET-32a,构建重组表达质粒pET-32a-LYZ1,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性菌株,经IPTG诱导,初步纯化表达产物,并对其进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果所构建的重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示,目的蛋白相对分子质量约为32000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的70%以上,切胶纯化后纯度达95%;Western blot分析显示,重组融合蛋白可与小鼠Anti-HisTag单抗特异结合。结论已成功原核表达并初步纯化了LYZ1,为后续研究与应用奠定了基础。

摘要：为了建立猪捷申病毒(PTV)的血清学检测方法,试验根据GenBank中已经登录的PTV基因序列设计了针对VP1基因的引物,将VP1基因经PCR扩增后克隆到真核表达载体pCAGGS中,用重组质粒pCAGGS-VP1转染293T细胞。结果表明:经间接免疫荧光方法验证VP1获得了表达;利用所建立的PTV VP1表达系统对哈尔滨周边地区的575份猪血清样品进行检测,PTV感染的阳性率为60.17%,说明哈尔滨周边地区猪群对PTV的感染率较高。

摘要：固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)是脂肪合成基因的重要转录调节因子,又称脂肪细胞决定和分化因子1。SREBP-1c主要在动物肝脏和脂肪细胞中表达,是脂肪代谢中重要的核转录因子,它可以通过调节脂肪代谢相关酶基因的表达来调控动物体内的脂肪合成。本试验设计合成了SREBP-1c的siRNA,通过脂质体转染将siRNA转染进犊牛原代肝细胞,用实时荧光相对定量PCR检测siRNA对SREBP-1c基因表达量的影响。结果显示:siRNA通过脂质体成功转入犊牛原代肝细胞;与对照组相比,一组转染细胞在mRNA水平检测到较低的SREBP-1c基因表达量。这表明siRNA可以稳定地在犊牛原代肝细胞中表达,并且对靶基因呈现出抑制作用。该研究为在基因水平防治奶牛肝脂沉积提供了基础。