摘要：随着课程改革的深入推进,小组合作学习模式已经在课堂教学普遍实施,并且取得了一定成效,但是在实践中仍然存在组内活动优生"包办"的现象。这样的教学模式与小组合作的根本目的是相悖的,最终的结果是出现严重的两极分化,成就了优生,抹杀了学困生的学习热情。而师徒互助模式则可弥补这种不足,其主要目的在于鼓励"先富"带动"后富",在小组内发挥品学兼优学生的帮、扶、带作用,帮助学困生克服学习障碍,提高学习成绩,从而使师徒相互切磋,缩小"贫富"差距,提高学生学习的有效性,进而实现共同富裕。这种教学模式不仅有利于开展小组活动,有利于培养学生的自主、合作、探究能力,也可以促使教师认清自己的地位,在教学中扮演好自己的角色——设计者、组织者、参与者、评价者以及合作者。

摘要：【目的】利用反向遗传操作技术,构建含O型口蹄疫病毒(food-and-mouth disease virus,FMDV)3个拓扑型免疫优势结构蛋白基因的重组FMDV,评估其作为猪O型口蹄疫(food-and-mouth disease,FMD)疫苗候选株的潜力。【方法】通过基因合成,在FMD疫苗株O/HN/CHA/93(古典中国拓扑型)的基因中嵌合流行株O/NXYCh/CHA/2018(东南亚拓扑型)VP1结构蛋白的重组病毒骨架上,用O/TUR/5/2009疫苗株(中东-南亚拓扑型)VP1蛋白的G-H环基因替换其对等基因,构建含O型3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组全长质粒,Not I线性化后转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞,拯救重组病毒。通过RT-PCR、序列测定、间接免疫荧光鉴定重组病毒;噬斑试验和一步生长曲线分析重组病毒的生物学特性。重组病毒制备疫苗免疫猪,用病毒中和试验分析其对当前流行的O型3个拓扑型FMDV的交叉反应性。【结果】成功拯救到含O型3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组病毒,重组病毒与亲本病毒具有相似的生物学特性。亲本病毒和重组病毒制备的疫苗免疫猪,均能够对中东-南亚型(Middle East-South Asia,ME-SA)拓扑型和东南亚型(South-East Asia,SEA)拓扑型病毒株产生保护性平均中和抗体(>1.65log10);均不能对古典中国型(Cathay)拓扑型流行株产生保护性平均中和抗体(<1.65log10),但与亲本病毒相比,O/TUR/5/2009疫苗株G-H环基因的替换显著提高了对ME-SA和SEA拓扑型病毒株的交叉反应性(P<0.05)。【结论】本研究对未来FMD疫苗的设计具有重要的指导意义。

摘要：主要探讨了T细胞免疫原TI对口蹄疫疫苗的免疫增强作用。设计并原核表达产生了一种包含口蹄疫病毒VP1,VP4,3A和3D蛋白上多个T细胞表位与两个通用T细胞表位的T细胞免疫原,命名为TI;同时表达了O和Asia 1两个型口蹄疫病毒VP1蛋白的串联编码基因,表达产物命名为OA-VP1。将上述T细胞免疫原分别与OA-VP1和口蹄疫灭活疫苗按不同剂量组合免疫小鼠,于免疫后不同时间测定各组小鼠的体液与细胞免疫应答情况。采用微量中和试验检测小鼠O型和Asia1型中和抗体,采用流式细胞检测技术和测定γ-干扰素的水平来分析不同免疫组小鼠细胞免疫的水平。结果显示,与灭活疫苗或OA-VP1单独免疫组相比,添加TI抗原后灭活疫苗(P<0.01)和OA-VP1免疫组(P<0.05)小鼠均能产生高水平的特异性中和抗体;且CD4+T细胞数量显著增多I,FN-γ产生水平显著升高(P<0.01)。说明TI抗原具有很好的诱导特异性体液与细胞免疫应答的作用,是一种很好的免疫增效剂,可作为口蹄疫蛋白亚单位疫苗和灭活疫苗中的一种有效成分,以提高疫苗的免疫效果。

摘要：为鉴定口蹄疫病毒非结构蛋白3A的单克隆抗体3A24#识别的表位区,对非结构蛋白3A分两个肽段进行原核表达,其中3A1和3A2肽段分别包含3A蛋白的第1位~89位和77位~153位氨基酸。分别针对两肽段基因设计并合成引物,PCR扩增后定向克隆到原核表达载体pET-30a（＋）-PES-SUMO,将重组质粒转化宿主菌*** BL21（DE3）pLys,IPTG诱导表达。用单克隆抗体3A24#对表达的3A1和3A2肽段进行Western blot检测,以鉴定单克隆抗体3A24#的识别表位肽。SDS-PAGE分析表明,成功表达了3A1和3A2肽段,大小分别为26ku和25ku。Western blot分析表明,FMDV牛阳性血清与两肽段均能识别,而单克隆抗体3A24#只能与3A2肽段发生反应,与3A1肽段不发生反应。3A24#单克隆抗体识别的抗原表位位于3A2肽段,即3A蛋白的第89aa~第153aa肽段上。