摘要：利用来源于TaV的自剪切多肽2A的编码序列构建一种分泌型萤光素酶Gluc和非分泌型萤光素酶Fluc共表达的载体,对其体内外表达及活体成像特点进行研究。采用重叠PCR技术获得Gluc-2A-Fluc片段,克隆入表达质粒pAAV2neoCAG中,获得重组质粒pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc。将重组质粒瞬时转染BHK-21细胞,24h后在细胞上清液和细胞裂解液中均能检测到Gluc和Fluc的表达,其中Gluc98%以上分布在上清液中,而Fluc98%以上存在于细胞中,随时间延长Gluc活性在上清液中逐步增加,而细胞内Fluc活性则保持相对平稳。用水动力法经小鼠尾静脉注射pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc质粒DNA,通过尾静脉微量采血(2.5μl/次)即可实时地监测体内Gluc的表达情况。活体成像结果显示,注射Gluc的底物腔肠素时小鼠明显表现为全身显像,显像在10min内迅速衰减;而注射Fluc的底物D-Luciferin时显像主要集中在肝脏,显像在30min内都比较稳定。本研究设计和构建的pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc质粒实现了分泌型和非分泌型萤光素酶的共表达,既可以在不裂解细胞或处死动物的情况下直接在细胞培养上清或血液中动态检测Gluc的活性,又可以利用活体成像技术准确定位Fluc表达部位,比单一的萤光素酶报告载体在细胞标记和体内示踪研究方面更具优越性。

摘要：目的探讨术前CT检查在B超定位引导建立经皮肾穿刺通道,进行经皮肾碎石取石术(PCNL)治疗肾结石以及输尿管上段结石,探讨其临床价值。方法术前患者行上腹部CT平扫,利用CT阅片系统设计肾穿刺点、穿刺方向及深度,帮助术中B超下肾穿刺点、穿刺方向及深度定位,建立经皮肾穿刺通道,对46例肾结石、输尿管上段结石患者进行微创皮肾穿刺输尿管镜取石术治疗。结果 46例结石患者全部手术成功,无1例中转开放性手术,成功率100%。30例肾结石取净率达80%,肾盂梗阻解除率达100%。16例输尿管上段结石(合并肾结石24例)均一次取净结石。结论术前CT检查和术中B超定位引导建立经皮肾穿刺通道行经皮肾输尿管镜取石术可提高B超定位引导建立经皮肾穿刺通道成功,缩短手术时间。