摘要：目的探讨从正常人细胞基因组ＤＮＡ中寻找、分离并鉴定肿瘤转移抑制基因或相应ＤＮＡ序列的新途径。方法采用体内转移灶体外再培养及硬琼脂集落克隆化筛选，获体内９０％以上高转移率小鼠肺腺癌ＬＭ２细胞株；使用磷酸钙共沉淀ＤＮＡ转染技术，将正常细胞人基因组ＤＮＡ随机片段，导入高转移小鼠肺癌细胞株ＬＭ２后，使用有限稀释法克隆化其中形态扁平的回复突变株。为证实细胞确实含有外源人ＤＮＡ序列，设计人特异性Ａｌｕ引物，对回复突变细胞ＤＮＡ进行ＩｎｔｅｒＡｌｕ－ＰＣＲ扩增。并以ｎｍ２３为探针进行ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交。对其中含人ＤＮＡ小鼠细胞，进行生长速率及硬琼脂集落生成率检测；最后细胞接种在裸小鼠及同系Ｔ７３９小鼠项背部皮下以检验其自发转移率。结果转染细胞经筛选获８株扁平状的回复突变株，经ＩｎｔｅｒＡｌｕ－ＰＣＲ扩增发现其中的６株含特异性人ＤＮＡ，ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交除对照ｋ５６２细胞ｎｍ２３阳性外皆为阴性。１２、２０、３２号生长速率及硬琼脂集落生成率明显低于母细胞ＬＭ２株。１２、２０号与ＬＭ２母细胞接种裸鼠后，全部长瘤，其中接种１２号株６只裸小鼠，１只瘤体在４０天后自发吸收消退且４只肺上无转移，而接种ＬＭ２母细胞的裸鼠全部有肺转移?

摘要：目的：探讨ＩｎｔｅｒＡｌｕＰＣＲ技术在筛选鉴定含人ＤＮＡ小鼠转染细胞和分离人源ＤＮＡ片段中的应用。方法：设计人特异性Ａｌｕ引物，通过ＩｎｔｅｒＡｌｕＰＣＲ扩增对转染人基因组ＤＮＡ后回复突变的小鼠细胞进行鉴定筛选；分离插入的人源ＤＮＡ片段；经原位ＰＣＲ鉴定其人源性。结果：应用该技术从８株回复突变株中筛选出６株含特异性人ＤＮＡ；从其中１２号小鼠细胞基因组ＤＮＡ中分离出３条人源ＤＮＡ片段；ＰＣＲ原位杂交确证所分离的ＤＮＡ片段具有人的特异性。结论：ＩｎｔｅｒＡｌｕＰＣＲ技术是应用于筛选鉴定含人ＤＮＡ杂种细胞、分离其中人源插入片段的简便、有效的方法。